人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒实验使用说明书

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　　人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　实验原理:

　　本试剂盒应用双夹心法测定标本中Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)水平。用纯化的Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)捕获包被微孔板,制成固相,往包被的微孔中依次加入Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP),再与HRP标记的检测结合,形成-抗原-酶标复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)含量。

　　样品采集:

　　收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存凝血因子IXELISA试剂盒

　　自备物品:

　　1 、 37 ℃ 恒温箱

　　2 、 标准规格酶标仪

　　3 、 精密移液器及一次性吸头

　　4 、 蒸馏水

　　5 、 一次性试管

　　6 、 吸水纸

　　人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒实验使用说明书样本处理及要求:

　　1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

　　2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

　　3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

　　4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

　　5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

　　6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

　　7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。