人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！本生试剂盒

　　人免疫抑制酸性蛋白 ( IAP )ELISA 试剂盒

　　( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 )

　　原理

　　本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 IAP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IAP与单抗结合，加入生物素化的抗人 IAP ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值，IAP 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IAP 浓度。

　　试剂盒组成 ( 2-8 ℃保存)

　　酶标 板 (Coated Wells )96 孔酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate )12ml

　　10 ×标本稀释液(Sample Buffer )12ml20×浓缩洗涤液( Wash Buffer )50ml

　　标准品 (Standards ) ： 8ng/瓶2 瓶底物工作液(TMB Solution )12ml

　　第一抗体工作液( Biotinylated Antibody )12ml终止液 (Stop Solution )12ml

　　准备试剂与收集血样

　　1. 收集标本：血清、血浆(EDTA )、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20 ℃或 -70 ℃ )保存，避免反复冻融。

　　2. 标准品液配制：使用前加入1ml 蒸馏水 混匀，配成 8000p g/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管， 每 管加入标本稀释液 20 0ul 。在第一管中加入 8000p g/ml 的标准品溶液 2 00ul 混匀后用加样器吸出 2 00ul ，移至第二 管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 2 00ul 弃去。第八 管 为空白对照。

　　3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。

　　4. 洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释(示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)

　　检测程序

　　1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

　　2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

　　3. 每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

　　4. 洗板：同前。

　　5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

　　6. 洗板：同前。

　　7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。

　　8. 每孔加入100ul 终止液混匀。

　　9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

　　结果计算与判断

　　1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

　　2. 以标准品40 00 、20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 0 pg /ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

　　3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 IAP 含量。

　　试剂盒性能

　　1. 灵敏度 ： 最小的IAP 检测浓度小于 3 0pg/ml。

　　2. 特异性： 可同时检测重组或天然的人 IAP 。 不与 人其它细胞因子有交叉反应。

　　3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10%。

　　注意事项

　　1. 以上标准孔及待 测 样品均建议做复孔，每次测定应同时 做 标准曲线。

　　2. 洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。

　　3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持 板条干燥 。

　　4. 本试剂盒宜置 4 o C冰箱保存。

　　5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断!