| 一、细胞基本属性 | ||||
| 细胞名称 | NK-92人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（STR鉴定正确） | |||
| 细胞别称 | NK-92；人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞；NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 | |||
| 种属来源 | 人 | |||
| 年龄性别 | 男；50岁 | |||
| 组织来源 | 淋巴 | |||
| 生长特性 | 悬浮生长 | |||
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 | |||
| 细胞代数 | 10代以内 | |||
| 背景介绍 | NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。 NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。NK-92细胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面标记阴性。 | |||
| 注意事项 | NK-92细胞复苏后需一周左右时间方可恢复状态，冻存时密度尽量大些 | |||
| STR位点 | Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:9,12；D16S539:11,12；D18S51:12,17；D21S11:31.2,32；D3S1358:15；D5S818:12,13；D7S820:10,11；D8S1179:12,15；FGA:20,22；PentaD:10,12；PentaE:12；TH01:6,9.3；TPOX:8；vWA:16,18 | |||
| STR鉴定图片 |  | |||
| 流式鉴定 |  | |||
| 生物安全等级 | 2 | |||
| 细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 | |||
| 支原体检测 | 无 | |||
| 保藏机构 | ATCC; CRL-2408 ；中国典型培养物保藏中心细胞库 | |||
| 培养基 | NK92专用培养基（已添加IL2） | |||
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ | |||
| 冻存条件 | 10%DMSO+50%FBS+40%培养基，液氮储存 | |||
| 倍增时间 | ~40-50 hours | |||
| 细胞货期 | 现货，1周左右 | |||
| 运输方式 | 复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递 | |||
| 供应限制 | 于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 | |||
| 特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主 | |||
| 二、细胞培养操作 | ||||
| 收货方式 | T25瓶 | 冻存管 | ||
| 收货处理 | 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-3h，以便稳定细胞状态 | 收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏 | ||
| 传代密度 | 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 | 第二天换液并检查细胞密度 | ||
| 传代比例 | 传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶 | ||
| 传代方法 | 摇晃培养瓶，使NK-92细胞粗略混匀，取NK-92细胞计数，按每毫升2-3x105个活细胞的细胞密度进行全换液或半换液。每48 h传一次。 | 37℃水浴融化后，750 rpm离心5 min，弃冻存液，加入培养基重悬，在培养瓶中培养，起始密度为每毫升2-3x105个细胞 | ||
| 注意事项 | 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。 | 1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存； 2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。 | ||
| 到货须知 | 1.收到NK-92细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 | |||
| 备注：客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以技术服务电话： 按 2，我们随时给予解答。 | ||||
| 三、细胞冻存操作 | ||||
| 冻存液配方 | 无血清冻存液，液氮储存 | |||
| 细胞密度 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 | |||
| 冻存方法 | 冻存液：10%DMSO+50%FBS+40%培养基，细胞计数后，取1×106~1×107个细胞，750 rpm离心5 min，弃原培养基，加入1 mL冻存液，轻轻混匀，标注封口后，放入冻存盒，置于-80℃24 h，再置于液氮气象。 | |||
| 注意事项 | 1. IL-2分装使用，避免反复冻融； 2. 先配置不培养基：用的时候再将IL-2加入培养基中； 3. 传NK-92细胞时，细胞不能在培养箱外放太久，小于1 h； 4. 重悬NK-92细胞要轻柔，不要太剧烈； 5. 不要加抗菌素，若一定要加，就加1%的青； 6. 全换液比半换液好些，每48 h传代一次； 7. 培养该细胞一定要IL-2 100-200 U/ml，IL-2浓度无需再增高，过高会影响NK-92细胞生长，也不能再降低，过低细胞会死亡 | |||
| 四、售后服务 | ||||
| 重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。 | |||
| 不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。 | |||
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