数据非依赖性的扫描模式（data-independent acquisition, DIA）是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式(1)。 DIA 扫描模式中，利用超高分辨质谱对特定质量范围内的 所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并依 次快速地扫描相邻的母离子窗口内的所有碎片离子。DIA 的数据中包含了所有碎片离子的保留时间和强度信息。因 此，可以用非常小的质量偏差窗口（如 10 ppm）目标性 地抽提同一肽段的多个子离子，计算子离子的强度，就能 对该肽段进行鉴定和定量。相比传统的基于母离子强度的 DDA 定量，DIA 定量具有选择性好和定量准确等优点，因 此 DIA 成为定量蛋白组学新的热门发展方向(2)。

赛默飞Q Exactive HF 是赛默飞世尔科技在 2014 年的 ASMS 上 推出的全新静电场轨道阱超高分辨质谱仪(3, 4)。Q Exactive HF 采用了分段式四级杆技术（Advanced Quadrupole Technology，AQT）使离子传输效率至少提高了 2 倍；超 高场 Orbitrap 技术，提高了 Orbitrap 扫描速度，在 15000 分辨率时，二级谱图的扫描速度是 20 Hz。这两项技术提 高了 Q Exactive HF 进行 DDA 和 DIA 数据的采集能力。 本文用 Q Exactive HF 质谱，90 min 色谱梯度对酵母蛋白 质组进行 DIA 定量分析，考察 Q Exacive HF DIA 定量的 能力。

实验材料和方法
两种状态的酵母（A,B），样品中加入iRT 肽段用于保留 时间校正，分别取 1 µg 进行 DDA 和 DIA 数据采集，DDA 用于建立谱图库，DIA 用于定量，每种采集模式重复 3 遍。

液相色谱分离 
液相色谱仪：Thermo Scientific Easy-nLC 1000；色谱柱： analytical column（C18，3 µm，100Å，75 µm x 15 cm）； 流 动 相：A：0.1% Formic acid in water；B：0.1% Formic acid in Acetonitrile； 梯 度： 3% - 10% B in 5 min, 10% - 30% B in 76 min，30%-90% B in 5 min, 90% - 90% B in 4 min；流速：300 nL/min