详细介绍
反应机理:
荧光特性:5-CFDA本身是非荧光的,但在细胞内或经过水解后,会生成具有强荧光的5-羧基荧光素(5-Carboxyfluorescein,5-FAM),其激发波长约为490 nm,发射波长约为518 nm,荧光颜色为绿色
5-CFDA是一种基于荧光素(Fluorescein)骨架的荧光染料前体。
荧光素核心:荧光素是一种常见的绿色荧光染料,具有良好的荧光特性和水溶性。
羧基(-COOH):在荧光素的5号位置引入了一个羧基,使其可以与其他分子进行化学偶联。
二乙酸酯(diacetate):两个乙酸酯基团(-OCOCH3)被引入到荧光素分子中,使其在细胞外是非荧光的,但在细胞内或经过酯酶水解后,会生成具有强荧光的5-羧基荧光素(5-FAM)。这种设计使其成为一种细胞可渗透的荧光探针。
细胞活性检测:5-CFDA常用于检测细胞的活性和代谢状态。细胞内的酯酶可以水解5-CFDA,生成绿色荧光的5-羧基荧光素(5-FAM),荧光强度与细胞活性成正比。
细胞标记:用于标记细胞,便于荧光显微镜观察细胞的形态和分布。
细胞增殖检测:通过荧光强度的变化,可以监测细胞的增殖和代谢活性。
蛋白质标记:5-CFDA可以通过羧基与蛋白质的氨基或其他活性基团反应,用于标记蛋白质。
核酸标记:用于标记寡核苷酸,研究核酸的代谢和相互作用。
5-羧基荧光素二乙酸酯(5-CFDA)是一种荧光染料前体,具有良好的细胞渗透性和荧光特性。它可应用于细胞成像、荧光探针开发和生物化学研究中。
结构式:
基础知识概述:
79955-27-4,5-Carboxyfluorescein diacetate(5-CFDA)
中文名:5- 羧基荧光素二乙酸酯
英文名:5-Carboxyfluorescein diacetate(5-CFDA)
分子式:C25H16O9
分子量:460.39
规格标准:1mg、5mg、10mg
试剂厂家:陕西新研博美生物科技有限公司
工作液的配制:
1.制备储存液
用 DMSO 配制 10 mM 的 5-CFDA。如用 0.2172 mL DMSO 溶解 1 mg 5-CFDA。
注:5-CFDA 储存液建议分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存。
2.配制工作液
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液,配制成 1-10 μM 的 5-CFDA 工作液。
注:请根据实际情况调整 5-CFDA 工作液浓度,且现用现配。
细胞染色:
1. 细胞制备:
悬浮细胞:离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。
贴壁细胞:弃去培养基,加入蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。
2. 加入 1 mL 5-CFDA 工作液,室温孵育 15 分钟。
3. 400 g,4℃ 离心 3-4 分钟,弃去上清。
4. 加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
5. 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,在荧光显微镜或流式细胞仪下检测。
注意事项:
1. 5-CFDA 储存液建议分装后于 -20℃下避光保存,避免反复冻融。
2. 请根据实际情况调整 5-CFDA 工作液浓度。
3. 本产品仅限于科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂(部分):
Carboxy-PEG5-sulfonic acid
Carboxy-EG6-undecanethiol
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Carboxy-PEG4-sulfonic acid
Carboxy finasteride
79955-27-4,5-Carboxyfluorescein diacetate(5-CFDA)