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FITC-Phalloidin是一种荧光标记的鬼笔环肽(Phalloidin)试剂

阅读:103          发布时间:2025-3-26
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理论分析:

英文名:FITC-Phalloidin 

分子式:C56H60N10O15S2 

分子量:1177.26  

产品详情:

规格:10mg、25mg、50mg 等

货期:根据具体的产品而定

纯度:95%+

用途:实验用途,科学研发,可定制服务

储存条件:干燥、避光,短期(数天至数周)在 0 - 4 C 或长期(数月至数年)-20 C。

注意事项:所有的试剂不可用于临床,不可用于食用,人体。

产品应用:

FITC-Phalloidin 是一种荧光标记的鬼笔环肽(Phalloidin)试剂,常用于细胞生物学和组织学研究中,用于特异性标记和检测细胞内的肌动蛋白丝(F-actin)。 

鬼笔环肽(Phalloidin)是一种从毒蘑菇中提取的环状七肽毒素,具有亲和力和特异性,能够选择性地结合肌动蛋白丝(F-actin),而不会与单体肌动蛋白(G-actin)结合。FITC(Fluorescein Isothiocyanate)是一种绿色荧光染料,通过化学键与鬼笔环肽结合后,可以用于荧光显微镜观察。

细胞和组织染色:FITC-Phalloidin 可用于固定和透化的细胞或组织切片的荧光染色,用于观察细胞骨架结构。

细胞形态学研究:通过标记 F-actin,可以研究细胞的形态变化、细胞迁移和细胞分裂等过程。

定量分析:可以用于定量分析细胞内 F-actin 的含量。

包装:

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使用方法:

一、工作液准备

1. 对于FITC标记鬼笔环肽(300T)

本品以溶于甲醇的20µM储存液形式提供,总量为300µl。按照100 nM的工作液浓度来换算,可制备总量为60 ml的工作液。建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。

开始实验前,使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。工作液现配现用。

2. 对于FITC标记鬼笔环肽(1mg

本品以冻干粉形式提供,分子量为1177.3,总量为1mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100µM的储存液。如,加入8.494ml甲醇到1mg鬼笔环肽即得到100µM等量的储存液,根据单次使用量,进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。

开始实验前,使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。工作液现配现用。

二、染色步骤

1. 细胞爬片生长24h,使其密度达到50%汇合度。

2. 吸掉培养液,37℃预热的1×PBS(pH 7.4)清洗细胞2次。

3. 使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10min。

※ 注意:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4. 室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

5. 室温条件下,用丙酮(≤-20℃)脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min。

6. 室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

7. 取200µl配制好的 FITC标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min(通常情况下,4℃~37℃孵育皆可)。

注意:为了降低背景,可于FITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。

8. 用PBS清洗盖玻片3次,每次5min。

9. 使用200µl DAPI溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约30s。

10. 用PBS清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂,然后用指甲油封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存,通常6个月内可继续做F-actin染色分析。

※ 注意:也可以直接使用含有DAPI的抗荧光淬灭封片剂,合并步骤9)10),简化步骤。

11. 荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择FITC激发/发射滤片(Ex/Em=496/516nm)和DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。

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