使用方法
样品染色：
1. 离心收集悬浮细胞。离心机300×g -500×g力，2-8°C，离心时间5分钟，弃培养基。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。（300×g -400×g，2-8°C，离心时间5分钟收集细胞）。
3. 用100 μl 1X Annexin V结合液悬浮细胞，浓度大约为1-5 X 106 cells/ml。
4. 在细胞悬浮液中加入5 μl Annexin V-APC染色液，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育5-15分钟。
5. 加入PI（或7-AAD）染色液后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育1-3分钟。（此步骤选做，根据实验需要也可以只做APC单染）。
6. 加入400 μl PBS或1X Annexin V结合液，轻轻混匀。
7. 立即用流式细胞仪检测。
流式细胞仪分析：
经处理过的细胞此时可以在流式细胞仪上分析。
按照常规的流式凋亡检测的操作即可。
Annexin V-APC的荧光激发波长652 m，发射波长670 m；PI荧光激发波长535 m，发射波长在620 m。
上机检测前，须用待测细胞制备质控样本来设定流式细胞仪的荧光补偿和设置十字门的范围：
（I） 未转染GFP等标记的细胞
① 空白管：阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/APC，PI。用于调节电压。
② 单染管：有明显凋亡的细胞，只加Annexin V/APC染色。用于调节补偿。
③ 单染管：有明显凋亡的细胞，只加PI染色。用于调节补偿
④ 检测管：待测的处理细胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和单阳管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
（II） 转染GFP细胞
① 未转染空白管：未转染细胞，阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/APC，PI。用于调节电压。
② 转染GFP空白管：转染GFP的对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/APC，PI。用于调补偿
③ 未转染单染管：未转染且有明显凋亡的细胞，只加Annexin V/APC染色。用于调节补偿。
④ 未转染单染管：未转染且有明显凋亡的细胞，只加PI染色。用于调节补偿
⑤ 检测管：待测的处理细胞，加Annexin V/APC，PI。用空白管和单阳管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
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