详细介绍
操作规程:
1、在96孔板加入细胞00μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入00微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入00微升5000~0000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~0μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及00%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 0%时的药物浓度(IC90)
中文名称:胶原酶IV型
英文名称:Collagenase IV
产品规格:100mg
发货周期:1~3天
本品为IV型胶原酶,≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units),特别适用于胰岛组织的消化。 本品来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有胶原酶(更准确的称法为梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶,多糖酶,脂酶等,分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质,使得本品非常适用于组织消化。 |
胶原酶(Collagenase)是一种蛋白酶,一种肽链内切酶,能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列(该序列高频率出现在胶原中,很少发现于其他蛋白中)并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽,但胶原酶是一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶,这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异,分为四种类型:胶原酶I型,II型,III型和IV型,在应用上有所偏向:
1)胶原酶I(Type I Collagenase):含有比较均匀的各种酶活力(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;
2)胶原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备;
3)胶原酶III(Type III Collagenase):含有较低的蛋白酶活性,常用于乳腺细胞的制备;
4)胶原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰岛细胞的制备,或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
酶活力单位定义
在37℃,pH7.5 的条件下,5h内水解胶原产生相当于1μM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
储存条件:4℃避光,有效期两年
注意事项:
1、本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
3、禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。
6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。
7、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融,否则将会增加空白吸收,从而影响检测结果。最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
8、用培养基或 PBS 来配制待检测药物。如果待测药物有还原性,则测定不含细胞,仅含有 MTS 的待测药物溶液在 490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入 MTS ,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用新鲜培养基洗涤细胞两次,然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl MTS 进行检测。
9、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
10、加 MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,对于大多数情况孵育 1 小时即可,白细胞需要培养较长时间。
11、如果不是使用 96 孔板检测,MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。
吗啉恶(标准品)英文名称: Caffeic acid磷化巨噬集落激因子受体抗体包装5g
吗贝(标准品)英文名称: Caffeic acid微管结合蛋白CYLD抗体包装100g
吗替麦考酚酯/霉酚酯(标准品)英文名称: Caffeic acid磷化微管结合蛋白CYLD抗体包装25g
麦白霉(标准品)英文名称: Neomycin sulfate磷化CBX5抗体包装5g
麦迪霉(标准品)英文名称: Neomycin sulfate霉抗体包装100mg
麦芽三糖(标准品)英文名称: Diphenhydramine hydrochloride磷化非受体酪激c-Abl抗体包装1g
麦芽糖(标准品)英文名称: Diphenhydramine hydrochloride磷化质膜微囊蛋白-1抗体包装500mg
没食子乙酯(标准品)英文名称: Polyinosinic acid磷化周期依赖激2抗体包装100g
霉酚; 麦考酚(标准品)英文名称: Mildronate,Meldonium磷化分裂周期蛋白25C抗体包装25g
美(标准品)英文名称: Mildronate,Meldonium磷化周期依赖性激2抗体包装5g
美罗培南(标准品)英文名称: Carrageenan质膜微囊蛋白-3抗体包装25g
美洛西林钠(标准品)英文名称: Pranlukast3号染色体开放阅读框34抗体包装5g
美洛昔康(标准品)英文名称: Metoprolol tartrateCD134抗体包装1g
美索巴莫(标准品)英文名称: Metoprolol tartrate单核趋化蛋白5抗体包装5g
美他多辛(标准品)英文名称: Arabic gum髓鞘相关糖蛋白CD57抗体包装100g
优雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 质量规格:HPLC>98%,标准品色C-1试剂盒甜菊糖;Stevioside
大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格:>98%,BR色b561试剂盒特女贞苷;Specnuezhenide
假单胞菌属Pseudomonas│sp. 质量规格:HPLC≥98%,标准品绒毛蛋白/埃兹蛋白试剂盒β-蜕皮激;Hydroxyecdyso
胶原酶IV型亚磷氢二钠五水合物
其他 五水亚磷钠
英文名称: Sodium phosphite dibasic pentahydrate
其他英文名称: di-Sodium hydrogen phosphite
产品规格: AR,98%
包 装: 250克/1公斤
CAS号:13517-23-2
Na2HPO3•5H2O=216.04
级别:AR
含量:≥98%
硫盐:≤50ppm
铁:≤10ppm
氯化物:≤50ppm
重金属:≤0.001%
性状:结晶粉末。
用途:生化研究。
保存:RT