详细介绍
商品介绍:
细胞凋亡时产生显著的变化是染色体固缩,DNA 裂解使细胞核形态产发生变化。荧光染料Hoechst33258 是一种无毒、水溶性双苯咪唑类化合物,可作为荧光探针与DNA 分子结合。 在凋亡细胞中,细胞膜对Hoechst 33258 的摄取增高,并且由于染色体高度浓缩,Hoechst 33258 与之结合增强,染色呈强蓝色荧光,而正常细胞只呈微弱荧光,死细胞则不被染色,由此可检测出凋亡。 |
操作方法(以下操作针对细胞爬片进行)
1. 培养细胞并爬片;
2. 用冷PBS 洗涤细胞二次(贴壁细胞原位固定染色)
3. 加入500μL 的4%溶液(用户自备),4℃固定细胞10-30min;
4. 洗去固定液,用PBS 洗两遍;
5. 滴加100μL Hoechst 33258 染色液,室温染色10 min,水冲净晾干;
6. 滴加一滴防淬灭封片液覆盖样本;
7. 以紫外光340nm 波长激发,发射波长为460nm,可以在荧光显微镜下观察。
储存:4℃,避光,有效期6个月。
产品属于:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
10ml|50ml | 1~3天 |
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
次野鸢尾黄(标准品)英文名称: Acid blue 40FA20A抗体包装500mg
甘草查尔(标准品)英文名称: Acid Red 6B成纤维生长因子18抗体包装1g
槐苷英文名称: Aflatoxin B1 from Aspergillus flavus叉头蛋白O1抗体包装25g
梨苷英文名称: Aflatoxin B2纤维母生长因子6抗体包装5g
梨果(标准品)英文名称: Aflatoxin G1免疫球蛋白A Fc段受体1抗体包装25g
梨叶(标准品)英文名称: Aflatoxin G2脂肪延长抗体包装5g
芒柄花苷(标准品)英文名称: Alizarin yellow R , sodium salt岩藻糖转移2抗体包装100mg
芒柄花;芒柄花黄(标准品)英文名称: ALL, D-Allose鸡白痢、鸡伤寒抗体包装500mg
玫果(标准品)英文名称: alpha-D-Glucose-1-phosphate, disodium salt, hydrate范可尼贫血相关蛋白F抗体包装250mg
囊(标准品)英文名称: alpha-Methylcinnamic acid卵泡抑抗体包装100mg
桐碱英文名称: Aluminum acetate, basicFas活化的丝/苏激抗体包装25g
五加(标准品)英文名称: Aluminum fluoride trihydrate脆性组三联体抗体包装5g
五加苷E(标准品)英文名称: Aluminum oxide, active纤维母表面蛋白抗体包装25g
五加皂苷B(标准品)英文名称: Aluminum oxide, active前列腺E受体4相关蛋白抗体包装5g
楤木(标准品)英文名称: Aluminum potassium sulfate docecahydrateFLAG Tag标签抗体(N端)包装5g
樟疫霉Phytophthora│cinnamomi Rands 质量规格:>99%,BR,可用于培养肾上腺试剂盒去乌药碱;Higenamine
根瘤菌Rhizobium│sp. 质量规格:HPLC>98%,标准品肾上腺皮质抗体试剂盒芹菜苷;Apiin
猪丹毒丝菌Erysipelothrix│rhuriopathiae 质量规格:>98%,BR蛋白试剂盒1-羟基-2,3,4,7-四氧基山山
oechst 33258染色液(即用型)戊烷磺钠
其他 1-戊烷磺钠;戊烷-1-磺钠盐;正戊烷磺钠;戊基磺钠
英文名称: Sodium 1-pentanesulfonate
其他英文名称: Sodium pentanesulfonate;1-Pentanesulfonic acid sodium salt;IPC-ALKS-5
产品规格: 超纯,99%
包装:5克/25克/100克/500克
CAS号:22767-49-3
C5H11O3SNa=174.19
级别:Ultra pure grade
含量:≥98.0%
水分:≤2.0%
性状:结晶粉末,熔点≥300℃。溶于水
用途:生化研究。表面活性剂,用于研究多重乳状液。离子对色谱用
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