详细介绍
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
产品属于:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介绍:
本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-1活性。测定原理基于Caspase-1特异水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-YVAD-pNA),释放出游离的硝基pNA,后者呈黄色在405nm具有大吸收峰,用可见光分光光度比色方法测定。其吸光度值对应于Caspase-1的水解活性。 |
细胞凋亡属于程序化细胞死亡,可见于各种器官和细胞,在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族,包含10多个成员。其中Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前体产生活性细胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前体蛋白产生20kD和10kD片断,这两个片断可以形成异源二聚体,并进一步形成四聚体。此四聚体具有蛋白酶活性。Caspase-1通过剪切Bcl-XL调节细胞凋亡,并通过对细胞因子前体的剪切来调控相关细胞因子介导的免疫炎性反应。
运输及保存:试剂常温运输。到达后按要求储存,1年内稳定。
所需仪器:酶标仪与96孔酶标板;或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。
工作波长:大吸收波长405nm,如不具备也可在400~450nm范围内测定,但灵敏度略降。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
蝶呤(标准品)英文名称: Fluoxetine Hydrochloride8号染色体开放阅读框4抗体包装100g
蝶呤二钠盐 (标准品)英文名称: Fluvoxamine maleateCD73抗体包装25g
磺丁脲(标准品)英文名称: Fluvoxamine maleate轴突相关粘附分子抗体包装500g
咪唑英文名称: Formestane6型胶原蛋白α5抗体包装1g
咪唑(标准品)英文名称: Formestane神经粘附分子CALL抗体包装5g
芬那(标准品)英文名称: Fosinopril sodium中性粒杀菌蛋白BP30抗体包装100ml
砜霉(标准品)英文名称: Furosemide21号染色体开放阅读框56抗体包装500ml
钴(标准品)英文名称: FurosemideT淋巴CD1抗体包装50ml
磺地平(标准品)英文名称: Gemfibrozil角蛋白5抗体包装100g
磺倍他司汀(标准品)英文名称: Gemfibrozil补体C9a抗体包装25g
磺达沙星(标准品)英文名称: Gliclazide20号染色体开放阅读框141抗体包装1g
磺多拉司琼(标准品)英文名称: Gliclazide20号染色体开放阅读框160抗体包装5g
磺多沙唑(标准品)英文名称: Glyburide/Gliebenclamide亲环蛋白(亲环)40抗体包装100g
磺酚妥拉明(标准品)英文名称: Glyburide/GliebenclamideT调控相关蛋白抗体包装25g
磺吉米沙星(标准品)英文名称: Glimepiride突触后蛋白CRIPT抗体包装5g
白灵侧耳(白灵菇)Pleurotus│nebrodensis 质量规格:HPLC>98%,标准品相扑结合UBC9试剂盒无柠檬;Citric acid
季也蒙毕赤酵母Pichia│guilliermondii 质量规格:干品纯度≥90.0%,干品含量≥85.0%,USP34腺嘌呤核苷转运蛋白试剂盒文多灵;Vindoline
pTargetFpTargetF 质量规格:含量测定腺苷脱试剂盒五味子;Schisandrin
Caspase-1活性测定试剂盒盐环胞苷
其他盐环胞啶;盐环胞甙;安西他滨盐盐
英文名称:Cyclo-C
其他英文名称:Cyclocytidine HC1;Ancitabine hydrochloride;2,2'-Anhydro-1-beta-D-arabinofuranosylcytosine hydrochloride
产品规格:高纯,98%
包 装: 5克
CAS号:10212-25-6
C9H11N3O4•HCl=261.66
级别:High purity grade
含量:≥98.0%
氯化物:≤0.01%
硫盐:≤0.01%
重金属:≤10ppm
性状:微黄色至黄褐色粉末,微溶于水,水溶液呈性,具旋光性,在260nm处有大吸收峰;主要由四种核糖核苷通过3′,5′-磷二酯键连接成单链大分子,单链大分子通过自身回折使碱基配对可形成双螺旋结构,分子量大于104,主要有三种即核糖体核糖核(rRNA)信使核糖核(mRNA)和转移核糖核(tRNA)。一种重要的生物大分子。易为强碱所降解,主要产生四种A、C、G、U 3′(2′)-核苷
用途:生化研究。核糖核的底物,也用于食品调味剂、核类及生化研究。与蛋白质生物合成有关,对DNA中遗传信息的表达十分重要。RNA在DNA复制中还起引物作用,对于DNA所含遗传信息的传递也是的
保存:2~8℃