小鼠附睾上皮原代细胞

小鼠附睾上皮原代细胞

小鼠附睾上皮细胞分离自附睾组织；附睾（Epididymis）是一个由曲折、细小的管子构成的器官，一端接着输精管（Ductusdeferens），一端接着睾丸（Testis）的曲细精管，具体结构主要包括输出小管和附睾管。附睾紧贴睾丸的上端和后缘，可分为头、体、尾三部。离开睾丸后通过输出小管进入附睾。附睾具有暂存精液并分泌附睾液营养的功能，以促进的进一步成熟附睾的功能是暂存，促进的进一步成熟。在附睾内获得运动能力，总共停留8～17天，终达到功能上的成熟。在这个过程中，除了自身的因素，还受到附睾微环境的影响，这包括了一系列的物理、化学变化和形态的改变。可以说，附睾微环境正常稳定是附睾发挥促成熟这一功能的必要条件。若附睾的功能发生异常，则不能成熟，引起不育。附睾上皮含有主细胞、基细胞、亮细胞等几种类型细胞。基细胞，其顶部离附睾管腔有一定距离，在附睾各部分，其形态没有差别，一般认为是贮备细胞；另一种主细胞，是维持附睾生理功能的物质基础，在各区段的主细胞形态结构差别很大，这也反映出各区段的生理功能的差异。除上皮细胞外，附睾的管壁组织结构也有规律性的变化，附睾管起始段平滑肌有自发地节律性收缩，而尾部平滑肌就没有这种特点，仅在射精一瞬间出现强烈的节律收缩。作为负责提供适合成熟微环境的附睾，具有活跃的分泌与吸收功能。其中，附睾上皮的电解质和水分的转运，对保持附睾内合适的离子浓度和酸碱度，为成熟提供适宜的环境起着相当重要的作用。睾丸的支持细胞每天能产生大量睾网液，如一只公羊每天约能分泌40毫升睾网液，而从附睾排出的只不过几百微升，也就是说睾丸分泌液有99%被附睾上皮重新吸收回体内。动物实验表明，结扎输精管时睾丸不会肿胀，但若结扎睾丸输出小管，睾丸第二天就会肿胀，这就充分证实了附睾存在着强有力的吸收功能，但是重新吸收的意义尚不清楚。体外培养附睾上皮细胞对的发育、成熟，附睾生理基础功能研究具有重要意义。

产品名称：小鼠附睾上皮细胞

组织来源：附睾

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

小鼠附睾上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

方法简介

实验室分离的小鼠附睾上皮采用胶原酶消化结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠附睾上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。