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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
公司实验室分离的小鼠成骨采用先用短时间消化、后用胶原酶反复消化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
公司实验室分离的小鼠成骨经ALP染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 小鼠成骨原代细胞 | 组织来源 | 颅骨组织 |
英文名称 | Mouse Osteoblast Cells | 货号 | YS-01X7315 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
小鼠成骨细胞分离自颅骨组织；颅骨位于脊柱上方，由23块形状和大小不同的扁骨和不规则骨组成。除下颌骨及舌骨外，其余各骨彼此借缝或软骨牢固连结，起着保护和支持脑、感觉器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。颅分脑颅和面颅两部分。脑颅位于颅的后上部，内有颅腔，容纳脑，共8块。面颅为颅的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等结构，构成面部的支架，共15块。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传3代左右
消化液 0.25%
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
RH-35细胞，肝癌细胞 人胃腺癌细胞,AGS细胞 黄牛皮肤细胞;BTA-S2 | 寡腺苷酸合成酶-1 |
Rho GTP酶激活蛋白32抗体 | 细胞分裂周期相关蛋白JPO2抗体 |
0脂酶C1样蛋白抗体 | 蛋白激酶C theta抗体 |
降压素受体1抗体 | 蓬乱蛋白1抗体 |
锌指蛋白437抗体 | 鸡新城疫抗体 |
杂交瘤(B类);C3110D2B2 | 小鼠髋动脉内皮细胞;PIEC |
KM小鼠未分化胶质瘤瘤株;B22 小鼠破骨细胞培养基 100mL | NRK-52E，大鼠肾细胞 Rattus |
小鼠内脏脂肪细胞培养基 100mL | IL17A Protein Canine 重组狗 IL17 / IL17A 蛋白 |
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H157 | 人真皮血管平滑肌细胞cDNAHDLEC cDNA |
THP1-Blue-CD14(稳定株)人单核细胞 THP1-Blue-CD14 (stable sain) in human monocytes 1640+10% FBS(热灭活)+200ug/ml Zeocin+10ug/ml Blasticidin S+0.05mM β-ME | 小鼠成骨原代细胞蛋白激酶C theta抗体 |
4T1 小鼠癌细胞 | ACVRL1 Others Human 人 ALK-1 / ACVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
人脂肪细胞-皮下(HPA-s)(1×106 ) | CM-M048小鼠肠巨噬细胞培养基100mL |
CNE-2Z(人鼻咽癌细胞) 5×106cells/瓶×2 | 四分子交联体6抗体（四旋蛋白） |
肺表面活性蛋白C前体肽抗体 | NCI-H520 人肺鳞癌细胞 |
抑癌基因结合蛋白ARID1B抗体 | 白细胞酪激酶受体抗体 |
颗粒细胞分化蛋白抗体 | 杂交瘤(B类);C3110D2B2 |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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