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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
公司实验室分离的小鼠表皮角化细胞先蛋白酶消化、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
公司实验室分离的小鼠表皮角化经PCNA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 小鼠表皮角化原代细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Mouse Epidermal Keratinized Cells | 货号 | YS-01X7513 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
小鼠表皮角化细胞分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层，少数位于棘细胞层。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加，并丧失分裂活性。
培养信息：
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
P3/NS1/1-Ag4-1细胞，鼠骨髓瘤细胞 人B淋巴细胞瘤细胞,RAMOS(RA.1)细胞 小鼠子细胞;U14 | 固醇酰A脱氢酶1抗体 |
Rho GTP酶激活蛋白1/血管畸形骨肥大综合征相关蛋白抗体 | 细胞分裂周期调控蛋白45抗体 |
酸乙转移酶A抗体 | 蛋白激酶B2 |
肌肉接头蛋白SNTA1抗体 | 配对盒基因7抗体 |
锌指蛋白403/喉癌相关蛋白1抗体 | 鸡传染性法氏囊病病毒抗体 |
ARPE-19(人视网膜上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 | F344大鼠骨髓间质干细胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells |
NW38细胞，人黑色素瘤细胞 鼠李糖乳杆菌 人胶质细胞瘤细胞;U251 | ANGPT2 Protein Mouse 重组小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白 (His 标签) |
人晶状体上皮细胞HLEpiC | EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY1036 |
CL-0133KLE(人子宫内膜癌细胞)5×106cells/瓶×2 | 小鼠食管上皮细胞培养基 100mL |
长尾绿猴胚胎细胞;4179 病毒转染小鼠细胞，PT-67细胞 SMMC-7721(肝癌细胞) | 小鼠表皮角化原代细胞蛋白激酶B2 |
人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38] | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) |
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人细胞裂解液 (阳性对照) | CM-M044小鼠结肠平滑肌细胞培养基100mL |
雪羊皮肤细胞;SSHS1 | 四分子交联体20抗体（四旋蛋白） |
肺癌相关蛋白8抗体 | 牛肾细胞;MDBK |
抑癌基因NDRG4抗体 | 白细胞介素6受体α抗体IL-6Rα |
颗粒蛋白前体抗体 | ARPE-19(人视网膜上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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