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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
实验室分离的兔脐静脉平滑肌采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测
实验室分离的兔脐静脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 兔脐静脉平滑肌原代细胞 | 组织来源 | 脐带 |
英文名称 | Rabbit Umbilical Vein Smooth Muscle Cells | 货号 | YS-01X8413 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
兔脐静脉平滑肌细胞分离自脐带组织；它是脐静脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。血管平滑肌是许多重大血管疾病的细胞基础；血管平滑肌细胞的异常增加的生长潜力在血管疾病发生过程中起决定作用。由于脐带是分娩过程中的废弃物，同时从脐带中分离人脐静脉平滑肌细胞方法相对成熟，使得体外培养的脐静脉平滑肌细胞作为研究血管的模型细胞。脐静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。
培养信息：
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传3代左右
消化液：0.25%
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
兔脐静脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
MDA-MB-453人癌细胞 Human breast cancer cell line MDA-MB-453 L-15+10%FBS | 酸化细胞分裂周期蛋白6抗体 |
酸化核糖体蛋白S6激酶家族RSK3抗体 | 转铁蛋白单克隆抗体 |
肿瘤抑制基因PHLPP抗体 | 酸化驱动蛋白样蛋白1抗体 |
转导β样蛋白1抗体 | 酸化细胞分裂周期蛋白6抗体 |
酸化驱动蛋白样蛋白1抗体 | 转铁蛋白单克隆抗体 |
RETN Protein Mouse 重组小鼠 Resistin / ADSF / RETN 蛋白 (Fc 标签) | 16HBE 人支气管上皮细胞 |
CL-0263BGC-803(人胃癌细胞)5×106cells/瓶×2 | RDFs, 大鼠真皮成纤维细胞 |
CM-H054人子宫成纤维细胞培养基100mL | 小鼠正常肝细胞;NCTC 1469 [NCTC1469] |
LTPEP-a-2 人肺腺癌细胞 | 小鼠肝实质细胞培养基 100mL |
MDA-MB-231, 人癌细胞 骨髓瘤,P3-X63-Ag8细胞 SW 1271 [SW-1271; SW1271](人肺腺癌细胞) | 兔脐静脉平滑肌原代细胞酸化驱动蛋白样蛋白1抗体 |
大鼠破骨细胞培养基 100mL | CPE Others Human 人 CPE 人细胞裂解液 (阳性对照) |
FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人细胞裂解液 (阳性对照) | CM-H132人小梁网细胞培养基100mL |
人肺癌细胞;A-427 [A427] | 酸化肿瘤抑制基因P53抗体 |
转导β样蛋白1抗体 | 兔源细胞 |
酸化核糖体蛋白S6激酶家族RSK3抗体 | 肿瘤抑制基因PHLPP抗体 |
酸化肿瘤抑制基因P53抗体 | RETN Protein Mouse 重组小鼠 Resistin / ADSF / RETN 蛋白 (Fc 标签) |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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