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详细介绍
兔角膜成纤维原代细胞
兔角膜成纤维细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部薄。角膜有十分敏感的末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的角膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。角膜成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持角膜的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
英文名称 | Rabbit Corneal Fibroblast Cells | 组织来源 | 眼角膜 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 产品货号 | YS-01X8375 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 | 生长特性 | 贴壁 |
产品名称：兔角膜成纤维细胞
组织来源：眼角膜
产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传5代左右；3代以内状态佳
消化液：0.25%
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
兔角膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
方法简介
实验室分离的兔角膜成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测
实验室分离的兔角膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
小鼠脑瘤细胞;BC3H1 | FAM36A蛋白抗体 |
G蛋白偶联受体110抗体 | 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白3抗体 |
蛋白激酶A锚定蛋白6抗体 | 脆性组三联体抗体 |
腺苷A2b受体/生长因子1受体抗体 | FAM36A蛋白抗体 |
脆性组三联体抗体 | 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白3抗体 |
CHL1 Others Mouse 小鼠 CHL-1 人细胞裂解液 (阳性对照) | NCI-H295R(人肾上腺皮质腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 Neuro-2A(脑瘤细胞) |
人骨肉瘤细胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS] | CD80 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD80 / B7-1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人细胞裂解液 (阳性对照) | BST2 Others Human 人 TETHERIN / BST2 / CD317 人细胞裂解液 (阳性对照) |
IL21R Others Human 人 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) | BDNF Others Mouse 小鼠 / 人 BDNF CHO细胞裂解液 (阳性对照) |
EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY1008 | 兔角膜成纤维原代细胞脆性组三联体抗体 |
IL4 Others Mouse 小鼠 IL4 / Ierleukin-4 (Q136D,Y139D) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) | 人十二脂肠腺癌;HuTu-80 |
前脂肪细胞分化培养基PADM-prf | AAV-293(人胚肾细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R027大鼠食管上皮细胞培养基100mL 人羊膜细胞;WISH |
GES细胞，人肾上皮细胞 小鼠B淋巴细胞,WEHI 231细胞 CL-0454TE-11(人食管癌细胞)5×106cells/瓶×2 | 相互作用蛋白FHL2抗体 |
腺苷A2b受体/生长因子1受体抗体 | PROM1 Others Rat 大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
G蛋白偶联受体110抗体 | 蛋白激酶A锚定蛋白6抗体 |
相互作用蛋白FHL2抗体 | CHL1 Others Mouse 小鼠 CHL-1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
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