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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
实验室分离的兔冠状动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测
实验室分离的兔冠状动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 兔冠状动脉平滑肌原代细胞 | 组织来源 | 冠状动脉 |
英文名称 | Rabbit Coronary Artery Smooth Muscle Cells | 货号 | YS-01X8125 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
兔冠状动脉平滑肌细胞分离自冠状动脉组织；冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则，将冠状动脉的分布分为三型：右优势型、均衡型、左优势型。左右冠状动脉是升主动脉的第一对分支。左冠状动脉为一短干，发自左主动脉窦，经肺动脉起始部和左心耳之间，沿冠状沟向左前方行后，立即分为前室间支和旋支。前室间支沿前室间沟下行，旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合。它是构成冠状动脉壁的主要细胞成分，细胞膜上分布着多种离子通道，如电压依赖性Na+通道、多种Ca2+通道和K+通道；它们参与了静息电位的维持与细胞膜电位的复极化、超极化，调节血管平滑肌的收缩及舒张功能，此外动脉粥样硬化的发展也涉及冠状动脉平滑肌细胞增殖、炎症及凋亡等。因此，原代分离培养的冠状动脉平滑肌细胞，对研究生理和病理状态下离子通道及血管张力变化机制具有非常重要的作用。冠状动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。
培养信息：
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传5代左右；3代以内状态佳
消化液：0.25%
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
兔冠状动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
小鼠胚胎成纤维细胞;BALB/C 3T3 | Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) 0酸化酪羟化酶抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml |
cPLA2(Human cytosolic phospholipase A2) ELISA Kit 人胞浆型0脂酶A2 96T | Mouse Anti-YERSINIA PESTIS Monoclonal Anti-body /FITC 荧光素标记鼠抗鼠疫F1蛋白/鼠疫耶尔森氏菌荚膜抗原F1单克隆抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh THRA1 甲状腺激素受体α1抗体 规格 0.2ml | LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9Multi-class antibodies规格： 48T |
HAPLN2： 透明质酸及粘蛋白2抗体 0.2ml | Rhesus antibody Rh caspase-9 p10 半胱胺酸蛋白酶蛋白9-p10抗体 规格 0.2ml |
FOXD2： 叉头蛋白D2抗体 0.2ml | ASD ELISA Kit 大鼠雄Multi-class antibodies规格： 48T |
ORM2 Others Human 人 ORM2 人细胞裂解液 (阳性对照) | EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
人红系白血病细胞;TF-1 | 人脂肪间充质干细胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105) |
KLE(人子宫内膜癌细胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 DLL1 / Delta-like 人细胞裂解液 (阳性对照) | PTN Others Mouse 小鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) |
5E Others Mouse 小鼠 5E / CD73 人细胞裂解液 (阳性对照) | HBSMC Pellet 人支气管平滑肌细胞团块 > 1 mio.cells 人间充质干细胞-脂肪裂解物HMSC-ad L |
EB病毒转化的绒猴淋巴细胞;B95-8 | 兔冠状动脉平滑肌原代细胞LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9Multi-class antibodies规格： 48T |
人外壳细胞(HHorSC)( 5×105 ) CSC, 小鼠心肌细胞 Mouse | CM-R018大鼠颌下腺上皮细胞培养基100mL |
786-O [786-0], 人肾透明腺癌细胞 Human | RWPE1细胞，人前列腺上皮细胞 鼬肺上皮细胞,MV-1-Lu细胞 小鼠海马趾元MN-h |
NRBF2 Others Human 人 NRBF2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) | Anti-RAR- Alpha /FITC 荧光素标记维受体-α 抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
Orosomucoid 2： 类粘蛋白2抗体 0.2ml | 人胚肺细胞系;KuMA 人肝内胆管上皮细胞培养基 100mL |
Somatostatin Receptor 2： 受体2抗体 0.1ml | phospho-CDKN2A (Ser152)： 0酸化抑癌基因p16抗体 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG 驴抗豚鼠IgG 规格 1mg | ORM2 Others Human 人 ORM2 人细胞裂解液 (阳性对照) |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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