化工仪器网
详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
公司实验室分离的兔关节软骨采用胶原酶联合蛋白酶消化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
公司实验室分离的兔关节软骨经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 兔关节软骨原代细胞 | 组织来源 | 关节软骨组织 |
英文名称 | Rabbit Articular Chondrocyte Cells | 货号 | YS-01X7003 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
兔关节软骨细胞分离自关节软骨组织；关节软骨属于透明软骨，表面光滑、呈淡蓝色、有光泽，它是由一种特殊的叫做致密结缔组织的胶原纤维构成的基本框架，这种框架呈半环形，类似拱形球门，其底端紧紧附着在下面的骨质上，上端朝向关节面，这种结构使关节软骨紧紧与骨结合起来而不会掉下来，同时当受到压力时候，还可以有少许的变形，起到缓冲压力的作用。在这些纤维之间，散在分布着软骨细胞，软骨细胞由浅层向深层逐渐由扁平样至椭圆或圆形的细胞组成，这些软骨细胞维持关节软骨的正常代谢。关节软骨没有支配，也没有血管，其营养成分必须从关节液中取得，而其代谢废物也必须排至关节液中，关节软骨的这种营养代谢必须通过关节运动，使关节软骨不断的受到压力刺激才行，所以关节运动对于维持关节软骨的正常结构起重要的作用。关节软骨细胞位于关节软骨陷窝内。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与关节软骨表面平行，越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形、染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内，这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，关节软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，关节软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的关节软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每3-4天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
HFTF细胞，人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 迟缓真杆菌/迟缓埃格特菌 小耳猪肺细胞;SEP-L2 | Rhesus antibody Rh GDF8 生长分化因子8/肌肉抑制素抗体 规格 0.2ml |
P I NP(Human procollagen I N-terminal peptide) ELISA Kit 人Ⅰ型前胶原N端前肽Multi-class antibodies规格： 48T | IgG/AP 碱性0酸酶(AP)标记的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml |
ILVBL： 乙酰乳酸合成酶蛋白抗体 0.2ml | PGE2 ELISA Kit 大鼠前列腺素E2 96T |
Rhesus antibody Rh Renin 肾素/血管紧张素形成酶Ren1抗体 规格 0.1ml | Anti-Leptin receptor(long) /FITC 荧光素标记瘦素受体抗体(长)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin (Ser16) 0酸化原癌基因蛋白18抗体 规格 0.1ml | MHC I /RLA I (Rabbit major histocompatibility complex I ) ELISA Kit 兔主要组织相容性复合体Ⅰ类 96T |
CCL21 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白 | 大鼠肠动脉内皮细胞培养基 100mL |
CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 灭活血清 | EGF Protein Human 重组人 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 标签) |
人胚肺二倍体细胞;KMB-17 | 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163 |
人小肠平滑肌细胞培养基 100mL | 人肺泡上皮细胞裂解物HPAEpiCL |
ECV304细胞，人脐静脉内皮细胞株 人小细胞肺癌细胞,NCI-H345细胞 CL-0403NCI-H524(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2 | 兔关节软骨原代细胞PGE2 ELISA Kit 大鼠前列腺素E2 96T |
HGC-27 人胃癌细胞(未分化) | CA10 Others Human 人 CA10 人细胞裂解液 (阳性对照) |
PRLR Others Mouse 小鼠 PRLR / Prolactin receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) | CM-H103胎儿真皮成纤维细胞培养基100mL |
人羊膜细胞;WISH | Rhesus antibody Rh APBA3/Mint3/X11gamma β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体 规格 0.2ml |
beta IV Tubulin： 微管蛋白β4抗体 0.2ml | KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株;LⅡ |
Anti-VEGF(Rabbit)/FITC 荧光素标记血管内皮生长因子抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | PTK9： 蛋白酪酸激酶9抗体 0.2ml |
Anti-CDK7/Cyclin H/MAT1 /FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶7抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | CCL21 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白 |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
化工仪器网