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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
实验室分离的兔骨骼肌微血管内皮采用胶原酶消化结合差速贴壁法、专用培养基筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测
实验室分离的兔骨骼肌微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 兔骨骼肌微血管内皮原代细胞 | 组织来源 | 骨骼肌 |
英文名称 | Rabbit Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells | 货号 | YS-01X8353 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
兔骨骼肌微血管内皮细胞分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体支配下收缩或舒张，进行随意运动。微血管又称毛细血管。分布于各种组织和细胞间的微细的血管。介于微动脉和微静脉之间。平均直径7-9微米，数量极多，成网状分布。管壁由一层内皮细胞及一薄层基膜组成，厚约0.5微米。基膜外面有薄层结缔组织，其中有纤维细胞、巨噬细胞和周细胞等。细的微血管由一个内皮细胞围成管腔，较粗的微血管由2-3个内皮细胞围成。分布于肌肉组织、组织和结缔组织中的微血管，内皮细胞间为缝隙连接（缝隙宽150埃），称连续微血管。血管内皮细胞在器官和组织的结构和功能上起着非常重要的作用。并与多种疾病的发生与发展有关。近年来血管内皮细胞在炎症、休克等一系列病理生理改变中的重要性愈来愈受到人们的重视。研究发现，不同来源的内皮细胞在生物学特征、结构和功能等方面均存在一定差别，而同是微血管内皮细胞，它们又存在器官和组织的特异性。骨骼肌组织是动物体内含量多的组织，肌肉组织供血丰富，是研究内皮细胞功能和血管生成的理想靶组织。
培养信息：
包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：内皮细胞样
传代特性：可传2-3代
消化液：0.25%
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
兔骨骼肌微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
小鼠前胃癌细胞;MFC | Anti-Tyk2/Non receptor tyrosine protein kinase 2 非受体酪蛋白激酶2抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml |
CDK5(Human Cyclin Dependent Kinase 5) ELISA Kit 人周期素依赖性激酶5 96T | Anti-HSA/FITC 荧光素标记鼠抗人血清白蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh thrombin II Ⅱ(II)抗体 规格 0.1ml | THP(Human T-H glycoprotein) ELISA Kit 人TH糖蛋白Multi-class antibodies规格： 48T |
HSPABP/HIP/HSC70 Interacting Protein HIP： 热休克蛋白70相互作用蛋白抗体 0.2ml | Rhesus antibody Rh Catalase 酶抗体 规格 0.1ml |
FOXH1： 叉头蛋白H1抗体 0.2ml | E2 ELISA Kit 大鼠雌二醇Multi-class antibodies规格： 48T |
CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人细胞裂解液 (阳性对照) | CA9 Others Human 人 CAIX / CA9 人细胞裂解液 (阳性对照) |
人滑膜细胞总RNAHS NA | EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人细胞裂解液 (阳性对照) |
MPC-11(小鼠浆细胞瘤) 5×106cells/瓶×2 BALB/3T3(BALB/C小鼠胚成纤维细胞) | GKN1 Others Human 人 GKN1 / Gasokine 1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) |
KIT Others Human 人 c-KIT / CD117 人细胞裂解液 (阳性对照) | Romas(人淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 WI-38(体胚肺细胞) |
Hep-2, 人喉癌细胞系 | 兔骨骼肌微血管内皮原代细胞THP(Human T-H glycoprotein) ELISA Kit 人TH糖蛋白Multi-class antibodies规格： 48T |
CD1d1 Others Mouse 小鼠 CD1D / R3G1 人细胞裂解液 (阳性对照) | 人肝动脉平滑肌细胞培养基 100mL |
Tca-8113(人舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2 | L1210小鼠白血病细胞 L1210 mouse leukemia cells DMEM培养基+10%FBS |
IGFBP5 Others Canine 狗 IGFBP5 / IGFBP-5 人细胞裂解液 (阳性对照) | Anti-RAM-11/FITC 荧光素标记抗RAM-11抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
2-Oct： 阳离子转运蛋白2抗体 0.1ml | CD226 Others Mouse 小鼠 DNAM-1 / CD226 人细胞裂解液 (阳性对照) |
SORCS1： 液泡蛋白分选受体SORCS抗体 0.2ml | phospho-CSF2RB (Tyr766)： 0酸化粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体β抗体 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的驴抗豚鼠IgG 规格 0.1ml | CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人细胞裂解液 (阳性对照) |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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