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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
公司实验室分离的鸡肾小管上皮采用筛网过滤、胶原酶消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
公司实验室分离的鸡肾小管上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 鸡肾小管上皮原代细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Chicken Renal Tubular Epithelial Cells | 货号 | YS-01X7034 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
鸡肾小管上皮细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。肾小管是机体肾脏器官上与肾小囊壁层相连的一条细长上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。肾小管按不同的形态结构、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和远端小管三部分；近端小管可分为直部和曲部，曲部也称为近曲小管，位于皮质迷路内，于肾小体附近高度蟠曲；远端小管曲部也称为远曲小管，位于皮质迷路内。肾小管上皮细胞是肾小管外面的一层细胞，肾小管上皮细胞的分离、培养是研究肾脏疾病的一项重要技术，目前该细胞分离方法有酶分离法、化学分离法筛网分离法、显微解剖分离法、流式细胞仪分离法等。肾小管上皮细胞主要功能：①肾小管上皮细胞重吸收原尿中几乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非营养物质进入终尿；③细胞能分泌炎症介质如细胞因子和趋化因子，通过产生IL-8或直接趋化白细胞参与急性炎症反应；④移植肾炎症和新月体肾炎中PTEpiC表达IL-2R和MHC-Ⅱ类抗原，这说明肾小管上皮细胞参与肾免疫损伤的发生。随着对肾间质纤维化机制研究的日渐加深，肾小管上皮细胞（RTECs）在其中的作用日益被人们重视。因此，提供良好的肾小管上皮细胞模型，在肾小管间质疾病的发病机制和治疗药物筛选的研究中是非常重要的
培养信息：
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1代
消化液 0.25%
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
中国仓鼠肺细胞;CHL 卵巢癌细胞，NIH:OVCAR-3细胞 L8824细胞，草鱼肝脏细胞 | Rhesus antibody Rh GIP 胃泌素抑制肽抗体 规格 0.2ml |
MART/Melan-A(Human Melanoma Marker A) ELISA Kit 人黑色素瘤标记物Multi-class antibodies规格： 48T | Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗亲和素 0.1ml |
Inhibin Alpha： 抑制素A/Inhibin α抗体 0.1ml | VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
Rhesus antibody Rh RLBP1L1 结合蛋白1抗体 规格 0.2ml | Anti-κOR/FITC 荧光素标记kappa型受体抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TNK1 (Tyr277) 0酸化非受体型酪蛋白激酶Tnk1抗体 规格 0.1ml | Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白 96T |
人胚皮肤成纤维细胞;CCC-ESF-1 | F344大鼠骨髓间质干细胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells |
HME2细胞，人黑色素瘤细胞 干酪乳杆菌干酪亚种 人癌细胞;MCF7 | USMC(大鼠血管平滑肌细胞) 5×106cells/瓶×2 |
EB病毒转化的人B淋巴细胞;HH-16 | 大鼠脑胶质瘤细胞;C6 |
中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1 | 间充质干细胞软骨细胞分化生长添加物MCDS |
RM-1细胞，前列腺癌细胞 人胚胎肠粘膜细胞,CCC-HIE-2细胞 恒河猴肾细胞;RM-2 | 鸡肾小管上皮原代细胞VD ELISA Kit 大鼠D 96T |
T-106AIV型胶原酶(含10mL酶解缓冲液)1mL | RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FSTL1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
CSNK2A1 Others Human 人 CSNK2A1 / CK2A1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) | CM-H012人支气管平滑肌细胞培养基100mL |
人肾透明细胞癌;Caki-1 | Rhesus antibody Rh APS APS抗体 规格 0.1ml |
BTBD17： BTB/POZ结构域蛋白17抗体 0.2ml | NCI-H520 肺鳞癌 |
Anti-RELMa/FITC 荧光素标记抵抗素样分子α抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | PPARGC1A： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α抗体 0.1ml |
Anti-CD133 Anti-gen/FITC 荧光素标记造血干细胞抗原CD133抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | 人胚皮肤成纤维细胞;CCC-ESF-1 |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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