大鼠子宫成纤维原代细胞

大鼠子宫成纤维原代细胞

大鼠子宫成纤维细胞分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官，位于盆腔中部，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的子宫成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。子宫成纤维细胞的主要特征：①是子宫的重要细胞组成，在体外易于培养；②在子宫损伤后能修复和重塑子宫；③在子宫炎症时能有效控制炎症扩散。

产品名称：大鼠子宫成纤维细胞

组织来源：子宫组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠子宫成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠子宫成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

大鼠胸肾表达趋化因子(BRAK)试剂盒 ，英文名： BRAK ELISA Kit

Pla gibberellic acid (GA) ELISA Kit 植物赤霉素(GA)试剂盒

MouseCollageypeⅢ,ColⅢELISAKIT 小鼠Ⅲ型胶原(ColⅢ)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanAi-ThrombinIII,AT-IIIELISAKit人抗Ⅲ抗体

细胞FES激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitBigET大鼠大内皮素

小鼠雄激素(androgen)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)试剂盒

Humanglucose-6-phosphateisomerase,GPIELISAKit 人葡萄糖60酸异构酶(GPI)试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenAcetoaceticacid,ACAC试剂盒鸡乙酰乙酸检测(ACAC)试剂盒规格：96T/48T

杂交清洗液500毫升

MouseHyaluronicacid,HAELISAKit小鼠透明质酸(HA)试剂盒规格：96T/48T

小鼠血栓前体蛋白   英文名称：   Mouse Thrombus Precursor Protein   规格：      英文缩写：   TpP

小鼠促甲状腺素   英文名称：   Mouse Thyroid Stimulating Hormone   规格：      英文缩写：   TSH

小鼠甲状腺素   英文名称：   Mouse Thyroxine   规格：      英文缩写：   T4

小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体   英文名称：   Mouse TNF-related apoptosis inducing ligand   规格：      英文缩写：   AIL

CNTN5重组人 Contactin 5 / CNTN5 蛋白 Protein

免疫球蛋白样EGF样域酪激酶1(Tie1)重组蛋白 Recombinant Tyrosine Kinase With Immunoglobulin Like And EGF Like Domains Protein 1 (Tie1)

GKN1重组人 GKN1 / Gastrokine 1 蛋白 Protein

CD68 Protein Human 重组人 CD68 / Macrosialin / Gp110 蛋白 (His & Fc 标签)

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

GLA Others Human 人 GLA / Alpha-galactosidase A 人细胞裂解液   WISH人羊膜细胞 Human WISH cells MEM(GIBCO)+10%FBS  CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人细胞裂解液   TDGF1 Protein Rat 小鼠原代睾丸内膜成纤维细胞 大鼠原代小梁网细胞

大鼠子宫成纤维原代细胞Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC 0.5mgAkt/PKC(Protein Kinase C,PKC) 蛋白激酶C(多肽抗原)

CD46 Protein Human 重组人 CD46 蛋白

FCGR3重组小鼠 CD16 / FCGR3 蛋白 Protein

CD79B Protein Rat 重组大鼠 CD79B / B29 蛋白 (Fc 标签)

CD1B重组人 CD1B / CD1A 蛋白 (Fc 标签) Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。