详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用,不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗!
细胞属性:
方法简介
公司实验室分离的大鼠直肠平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
公司实验室分离的大鼠直肠平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 大鼠直肠平滑肌原代细胞 | 组织来源 | 直肠组织 |
英文名称 | Rat Rectal Smooth Muscle Cells | 货号 | YS-01X7170 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介:
大鼠直肠平滑肌细胞分离自直肠组织;直肠为大肠的未段,位于小骨盆内。上端平第3骶椎处接续乙状结肠,沿骶骨和尾骨的前面下行,穿过盆膈,下端以门而终。直肠上端的大小似结肠,其下端扩大成直肠壶腹,是粪便排出前的暂存部位,下端变细接管。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切,与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带,位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉,来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式;肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生,这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性。利用肠平滑肌细胞的培养,可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品:
大鼠血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)试剂盒 ,英文名: VEGFR3 ELISA Kit
Mouse hydrocoisone (HYD) ELISA Kit 小鼠轻化1(HYD)试剂盒
Mousemaixmetalloproteinase10,MMP-10ELISAkit 小鼠基质金属蛋白酶10(MMP-10)试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforHumanBetacatenin,Beta-CatELISAKit人β连环蛋白/联蛋白
细胞D-乳酸比色法定量试剂盒20次
ELISAKiesistin大鼠抵抗素
小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA 试剂盒 96T/48T
Human epithelial specific aigen (ESA) ELISA Kit 人上皮特异性抗原(ESA)试剂盒
Humanlymphotoxinα,LTAELISAKit 人淋巴毒素α(LTA)试剂盒 96T/48T 进口分装
Humanai-golgiapparatusaibody,AGAA试剂盒人抗高尔基体抗体(AGAA)试剂盒规格:96T/48T
植物亮(leucine)含量高效液相色谱法定量试剂盒20次
HumanVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit人内脏脂肪特异性丝蛋白酶抑制剂(vaspin)试剂盒规格:96T/48T
小鼠红细胞生成素受体(mouse EPOR) 作用: ELISA 规格: 进口分装
小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(mouse ECP) 作用: ELISA 规格: 进口分装
小鼠上皮粒细胞活化肽-78(mouse ENA-78) 作用: ELISA 规格: 进口分装
小鼠血管内皮抑素(mouse Endostatin) 作用: ELISA 规格: 进口分装
CTSL1重组人 Cathepsin L1 / CTSL1 蛋白 Protein
内皮脂肪酶(LIPG)重组蛋白 Recombinant Lipase, Endothelial (LIPG)
PILRA重组人 PILR-alpha / PILRA 蛋白 (Fc 标签) Protein
CD5L Protein Human 重组人 CD5L / API6 蛋白
NP Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) Nucleocapsid / NP
GFRA3 Others Mouse 小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 人细胞裂解液 CD2 Others Canine 狗 CD2 人细胞裂解液 长尾绿猴胚胎细胞;4179 叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21 N-H 小鼠骨髓瘤淋巴细胞 HL-02 小鼠原代股骨头微血管内皮细胞 人原代结膜上皮细胞
大鼠直肠平滑肌原代细胞Fibulin 1 衰老关键蛋白抗原 0.5mgFibulin 1 衰老关键蛋白抗原
GPR114 Protein Human 重组人 GPR114 蛋白 (Fc 标签)
GGT1重组大鼠 GGT1 蛋白 Protein
EPHA4 Protein Mouse 重组小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)
HSF1重组人 HSF1 / HSTF1 蛋白 Protein
操作步骤:
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。