大鼠直肠黏膜上皮原代细胞

大鼠直肠黏膜上皮原代细胞

大鼠直肠黏膜上皮细胞分离自直肠组织；直肠为大肠的未段，位于小骨盆内。上端平第3骶椎处接续乙状结肠，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿过盆膈，下端以门而终。直肠上端的大小似结肠，其下端扩大成直肠壶腹，是粪便排出前的暂存部位，下端变细接管。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切，与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉，来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的第一道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为首先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。

产品名称：大鼠直肠黏膜上皮细胞

组织来源：直肠

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠直肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

方法简介

实验室分离的大鼠直肠黏膜上皮采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠直肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

大鼠血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)试剂盒 ，英文名： PROCR ELISA Kit

Mouse hydroxyproline (Hyp) ELISA Kit 小鼠羟脯(Hyp)试剂盒

Mousemaixmetalloproteinase13,MMP-13ELISAkit 小鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanBetaLactoglobulin,Beta-LgELISAKit人β乳球蛋白

细胞D-葡萄糖氧化法定量试剂盒20次

ELISAKitFⅧAg大鼠第八因子相关抗原

小鼠Ⅲ型前胶原基端肽(PⅢ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat cyclin D2 (Cyclin-D2) ELISA Kit 大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)试剂盒

HumanHydrocoisone,HYDELISAKit 人轻化1(HYD)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanComplemefragme5b,C5b试剂盒人补体片断5b(C5b)试剂盒规格：96T/48T

组织CDK3/CYCLINE激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit人蛋白酶3特异性抗粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)试剂盒规格：96T/48T

兔子胶质纤维酸性蛋白(GFAP)试剂盒   96T/48T

兔子前列腺素E2(PGE2)试剂盒   96T/48T

兔子前列腺素E1(PGE1)试剂盒   96T/48T

兔子葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)试剂盒   96T/48T

EFNA1重组小鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (Fc 标签) Protein

ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2 0.5mgASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2) P53凋亡刺激蛋白2抗原

NEIL1重组人 NEIL1 蛋白 Protein

CD63 Protein Human 重组人 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

THY1 Protein Rat 重组大鼠 CD90 / THY-1 蛋白

GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液   人胚肾细胞;293 [HEK-293] GH3, 大鼠垂体生长激素腺瘤 Rattus  rEPC，大鼠内皮祖细胞-骨髓  中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS3 小鼠原代骨骼肌成纤维细胞 大鼠原代α-SMA阳性肾周肌成纤维细胞

大鼠直肠黏膜上皮原代细胞肾素(REN)重组蛋白 Recombinant Renin (REN)

CTHRC1 Protein Human 重组人 CTHRC1 蛋白

HSPB1重组人 HSP27 / HSPB1 蛋白 Protein

HA Protein Influenza 重组甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

MAPK14重组人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 标签) Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。