大鼠外周血单核原代细胞

大鼠外周血单核原代细胞

大鼠外周血单核细胞分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。单核细胞起源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育。当它们从骨髓进入血液时仍然是尚未成熟的细胞。与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用。单核细胞在血液中停留2-3天后迁移到周围组织中，细胞体积继续增大，直径可达50-80μm，细胞内所含的溶酶体颗粒和线粒体的数目也增多，成为成熟的细胞。固定在组织中的单核细胞称为组织巨噬细胞，它们经常大量存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素，参与机体防卫机制，还产生一些能促进内皮细胞和平滑肌细胞生长的因子。在炎症周围单核细胞能进行细胞分裂，并包围异物。

产品名称：大鼠外周血单核细胞

组织来源：外周血

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 半贴壁半悬浮

细胞形态 圆形、巨噬细胞样

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

方法简介

普诺赛实验室分离的大鼠外周血单核采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

普诺赛实验室分离的大鼠外周血单核经CD14免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

大鼠中期因子(MK)试剂盒 ，英文名： MK ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)试剂盒

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 小鼠FMS样酪激酶3(Flt3)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanH-rasELISAKit人H-ras

B1荧光定量试剂盒20次

ELISAKitCav-1大鼠窖蛋白Caveolin1

小鼠膀胱抗原(BTA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat noradrenaline (NA) ELISA Kit 大鼠去甲(NA)试剂盒

Humanurokinase-typeplasminogenactivator,uPA/PLAUELISAKit 人型纤溶酶原激活物(uPA/PLAU)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanbreastcancersusceptibilityprotein2,BRCA-2试剂盒人癌易感蛋白2(BRCA-2)试剂盒规格：96T/48T

植物组织线粒体超氧化物歧化酶(Mn/FeSOD)分离试剂盒50次

Humansorbitoldehydrogenase,SDHELISAKit人脱氢酶(SDH)试剂盒规格：96T/48T

血管内皮生长因子受体2   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   规格：      英文缩写：   VEGF-R2

血管内皮生长因子受体3   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   规格：      英文缩写：   VEGF-R3

血管活性肠肽   英文名称：   vasoactine inestinal peptide   规格：      英文缩写：   VIP

内脂素/内脏脂肪素   英文名称：   Visfatin   规格：      英文缩写：   Visfatin

EPHA3重组小鼠 EphA3 蛋白 (aa 569-984) Protein

甲状旁腺激素(PTH)重组蛋白 Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)

CPLX3重组人 CPLX3 / Complexin 3 蛋白 Protein

EGFL7 Protein Human 重组人 EGFL7 / VE-statin 蛋白

IL1B Protein Canine 重组狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白

DDR2 Others Mouse 小鼠 DDR2 Kinase / CD167b 人细胞裂解液   人角膜成纤维细胞 (HcorF) SERPINF1 Others Human 人 SerpinF1 / SERPINF1 / PEDF 人细胞裂解液   NCI-H596(人肺腺鳞癌细胞) 小鼠原代脑微血管周细胞 人原代下腔静脉外膜成纤维细胞

大鼠外周血单核原代细胞钙结合蛋白(CR)重组蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CSNK1A1 Protein Human 重组人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 标签)

PTPRC重组小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 标签) Protein

IL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

CRIPT重组人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。