大鼠退行性椎间盘髓核原代细胞

大鼠退行性椎间盘髓核原代细胞

大鼠退行性椎间盘髓核细胞分离退行性椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，分为中央部的髓核，富于弹性的胶状物质；周围部的纤维环，由多层纤维软骨环按同心圆排列。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。髓核，是乳白色半透明胶状体，富于弹性，为椎间盘结构的一部分，位于两软骨板与纤维环之间。由纵横交错的纤维网状结构即软骨细胞和蛋白多糖黏液样基质构成的弹性胶冻物质。婴幼儿时期的髓核含水量为80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生时体积大而松散，位于椎间盘的中央，至成年时位置移至椎间盘的中后部；在成年以前构成髓核的主要物质是大量蛋白多糖复合体、胶原纤维和纤维软骨，随着年龄的增长，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐渐减少，胶原增粗并逐渐被纤维软骨所替代。

产品名称：大鼠退行性椎间盘髓核细胞

组织来源：椎间盘

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基：基础培养基，含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每3-4天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠退行性椎间盘髓核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

方法简介

实验室分离的大鼠退行性椎间盘髓核采用胶原酶-蛋白酶混合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠退行性椎间盘髓核经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

大鼠粒细胞明胶酶关联脂质运载蛋白(NGAL)试剂盒 ，英文名： NGAL ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 40 Ligand (sCD40L) ELISA Kit 小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)试剂盒

MouseFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit 小鼠凋亡相关因子配体(FASL)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanHypotheticalproteinLOC677168ELISAKit人假定蛋白LOC677168

B12比色法定量试剂盒20次

ELISAKitHpt/HP大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白

小鼠游离前列腺特异性抗原(fPSA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai histone aibody (AHA) ELISA Kit 人抗组蛋白抗体(AHA)试剂盒

HumanNeurotensin,ELISAKit 人降压素()试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-iso-PGELISAKit大鼠8异前列腺素

异硫酸胍1公斤

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)试剂盒规格：96T/48T

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠钙通道阻滞剂(CCB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠转酶/谷转酶(ALT/GPT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

FCGR2重组小鼠 CD32 / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签) Protein

ADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 0.5mgADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 ) 新型金属基质蛋白酶(抗原)

SULT1A3重组人 SULT1A3 蛋白 (His 标签) Protein

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 标签)

CHODL Protein Rat 重组大鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 (His 标签)

DCBLD2 Others Human 人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 人细胞裂解液   ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人细胞裂解液   真皮成纤维细胞Many   中国仓鼠卵巢细胞-二氢还原酶缺陷型;CHO/dhFr 小鼠原代膀胱基质成纤维细胞 兔原代结膜囊成纤维细胞

大鼠退行性椎间盘髓核原代细胞内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)重组蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

CSNK1G1 Protein Human 重组人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 标签)

CPA2重组人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

NA Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

ERBB4重组人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。