大鼠视网膜微血管内皮原代细胞

大鼠视网膜微血管内皮原代细胞

大鼠视网膜微血管内皮细胞分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、节细胞层、纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视乳头。视网膜上的感觉层是由三个元组成。第一元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多。第二层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的纤维跨越视网膜表面，经由视到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力强。它是组成血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在视网膜血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。由于从不同的组织和器官获得的内皮细胞具有不同的特性，在脑和视网膜中，这些内皮细胞具有内屏障的功能，在调节血管生理状态，释放血管活性物质以及新生血管的形成中发挥着重要作用，体外分离培养RCEC对研究视网膜血管性疾病发生发展的病理生理机制以及疾病的早期防治具有重要临床意义。

产品名称：大鼠视网膜微血管内皮细胞

组织来源：视网膜组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠视网膜微血管内皮采用胶原酶-蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠视网膜微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

大鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员5(TNFRSF5)试剂盒 ，英文名： TNFRSF5 ELISA Kit

Mouse ai endomeial aibody (EMAb) ELISA Kit 小鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)试剂盒

MouseE-Cadherin,E-CadELISAKit 小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumaninsulinaoaibodies,IAAELISAKit人胰岛素自身抗体

微型RNA(miRNA)酶保护分析试剂盒5次

ELISAKitMIP-3α大鼠巨噬细胞性蛋白3α

小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat somal cell derived factor 1A (SDF-1a/CXCL12) ELISA Kit 大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)试剂盒

Humanai-cyclicciullinatedpeptide,CCPELISAKit 人抗环胍肽抗体(CCP)试剂盒 96T/48T 进口分装

HeneggImmunoglobulinofYolk,IgY试剂盒鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞细胞壁分离试剂盒20次

mouseBeta-Endorphin,β-EPELISAKit小鼠β内啡肽(β-EP)试剂盒规格：96T/48T

小鼠CXCR4(mouse CXCR-4)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠皮质(mouse Coicosterone)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠环氧化酶-2 (mouse COX-2)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠结缔组织生长因子(mouse CTGF)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

TSPAN1重组人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 标签) Protein

Sox2 胚胎干细胞关键蛋白 0.5mgSox2 胚胎干细胞关键蛋白

EFNB1重组人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CSF2 Protein Human 重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PLAU Protein Human 重组人 Urokinase / PLAU 蛋白

CTNNB1 Others Human 人 beta-Catenin / CTNNB1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液   小鼠小管上皮细胞   胎儿真皮成纤维细胞Many   子宫内膜上皮细胞Many   WI-38(人胚肺细胞)   CBRH-7919 大鼠肝癌细胞 小鼠原代脾源性内皮祖细胞 兔原代小肠隐窝上皮细胞

大鼠视网膜微血管内皮原代细胞胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2)

HAVCR1 Protein Human 重组人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (aa 1-135, His 标签)

TNFRSF1A重组人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

ACNB Protein E. coli 重组大肠杆菌 acnB 蛋白

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。