大鼠气管平滑肌原代细胞

大鼠气管平滑肌原代细胞

大鼠气管平滑肌细胞分离自气管组织；气管（Trachea），呼吸器官的一部分；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连；向下至第四、五胸椎体（相当胸骨角平面）交界处，分左、右主支气管，分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成，有弹性，软骨为“C"字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。气管平滑肌是气管的重要结构组成之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用；能够保持气道张力，维持气道管状形态，从而有利于气体流通，保持肺部通气。气管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。气管平滑肌细胞的异常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是气道重塑的关键。

产品名称：大鼠气管平滑肌细胞

组织来源：气管

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠气管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠气管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人幽门螺旋杆菌热休克蛋白60(HP-HSP60)试剂盒

Major histocompatibility complex class III (MHC III /HLA- III) ELISA Kit 人主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)试剂盒

Humanmelanocytestimulatinghormone,MSHELISAKit 人黑色素细胞刺激素(MSH)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanierferon-inducibleprotein10,IP-10试剂盒人干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)试剂盒规格：96T/48T

组织精(arginine)含量高效液相色谱法定量试剂盒20次

HumanJo-1Aibody,Jo1/HRSELISAKit人Jo1抗体/抗组氨酰NA合成酶抗体(Jo1/HRS)试剂盒规格：96T/48T

豚鼠白介素17(IL-17)试剂盒 ，英文名： IL-17 ELISA Kit

Human arylsulfatase A (ASA) ELISA Kit 人芳基酯酶A(ASA)试剂盒

rabbitLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 兔子白三烯B4(LTB4)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta2-MGβ2-微球蛋白

细菌乙酰甲基原醇V-P试剂盒20次

rabbitFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)试剂盒规格：96T/48T

人早期生长应答蛋白1(EGR1)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human EGR1 (Early Growth Response Protein 1) ELISA Kit

人早期生长应答蛋白2(EGR2)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human EGR2 (Early Growth Response Protein 2) ELISA Kit

人早期生长应答蛋白3(EGR3)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human EGR3 (Early Growth Response Protein 3) ELISA Kit

人早期生长应答蛋白4(EGR4)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human EGR4 (Early Growth Response Protein 4) ELISA Kit

SOST重组大鼠 Sclerostin / SOST 蛋白 Protein

Hpt/HP(haptoglobin 0.5mgHpt/HP(haptoglobin) 结合珠蛋白/触珠蛋白抗原

YES1重组人 c-Yes / YES1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CFHR1 Protein Human 重组人 CFHR1 蛋白

MIF Protein Mouse 重组小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白

CM-H043人肝实质细胞HA Others H10N3 甲型流感 H10N3 (A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液   HNE2, 人鼻咽癌细胞系 NIH SWISS小鼠胚细胞 小鼠原代视网膜muller细胞 人原代胰腺癌相关成纤维细胞

大鼠气管平滑肌原代细胞甘露糖受体C1样蛋白1(MRC1)重组蛋白 Recombinant Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1(MRC1)

IL9 Protein Human 重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

AKT3重组小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 标签) Protein

FCGR2B Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白

CDH1重组人 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 (Fc 标签) Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。