大鼠脐动脉平滑肌原代细胞

大鼠脐动脉平滑肌原代细胞

大鼠脐动脉平滑肌细胞分离自脐带组织；它是脐动脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。由于脐带是分娩过程中的废弃物，同时从脐带中分离脐静动平滑肌细胞方法相对成熟，使得体外培养的脐动脉平滑肌细胞作为研究血管的模型细胞。脐动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

产品名称：大鼠脐动脉平滑肌细胞

组织来源：脐带

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠脐动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的优良培养状态。

方法简介

实验室分离的大鼠脐动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠脐动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 试剂盒

Human tumor specific aigen (TSA) ELISA Kit 人肿瘤特异性抗原(TSA)试剂盒

HumanADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISAKit 人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humaninsulinaoaibodies,IAA试剂盒人胰岛素自身抗体(IAA)试剂盒规格：96T/48T

组织基质金属蛋白酶(MMP-9)琥珀酰明胶法比色定量试剂盒20次

HumanLegionellaaibodyIgM，LPAb-IgMELISAKit人军团菌抗体IgM(LPAb-IgM)试剂盒规格：96T/48T

豚鼠白介素1β(IL1B)试剂盒 ，英文名： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素结合酶(E2/UBCE)试剂盒

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人绒毛膜β

细菌乙醇脱氢酶总活性(NDMA)比色法定量试剂盒20次

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)试剂盒规格：96T/48T

人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人过氧化酶(GSH-Px)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人17-类固醇(17-KS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

KLK13重组人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白 Protein

胎盘碱性0酸酶(ALPP)重组蛋白 Recombinant Alkaline Phosphatase, Placental (ALPP)

SEMA3A重组人 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 标签) Protein

HIST1H3A Protein Human 重组人 Histone H3.1 / HIST1H3A / H3FA 蛋白

HA Protein H11N2 重组甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CLEC5A Others Cynomolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人细胞裂解液   MDA-MB-468(人癌细胞)     CM-H030人外周血白细胞胰岛β细胞Many   CCL3 Protein Rat 小鼠原代视网膜微血管内皮细胞 兔原代滑膜间充质干细胞

大鼠脐动脉平滑肌原代细胞Gastrin(human 0.5mgGastrin(human)peptide(1-17) 胃泌素/蛙皮素(多肽人源)

IZUMO4 Protein Human 重组人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 标签)

PVRL1重组大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 (Fc 标签) Protein

ACE2 Protein Mouse 重组小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 标签)

F7重组人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。