大鼠胚胎成纤维原代细胞

大鼠胚胎成纤维原代细胞

大鼠胚胎成纤维细胞分离自胚胎；成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。

产品名称：大鼠胚胎成纤维细胞

组织来源：胚胎组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠胚胎成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠胚胎成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE/ADAM17)ELISA 试剂盒

Human ue insulin (TI) ELISA Kit 人真胰岛素(TI)试剂盒

HumanHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit 人热休克蛋白20(HSP-20)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanhiston-H2b试剂盒人组蛋白H2b(histon-H2b)试剂盒规格：96T/48T

组织环氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性比色法定量试剂盒20次

Humanlowdensitylipoprotein，LDLELISAKit人低密度脂蛋白(LDL)试剂盒规格：96T/48T

豚鼠白介素8(IL-8)试剂盒 ，英文名： IL-8 ELISA Kit

Two adenosine monophosphate (ADP) ELISA Kit 人二0酸腺苷(ADP)试剂盒

rabbitSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 兔子S100B蛋白(S-100B)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EPRELISAKit大鼠β内啡肽受体

细菌血液琼脂平板50个

RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit兔热休克蛋白20(HSP-20)试剂盒规格：96T/48T

小鼠新生甲状腺素(NN-T4)试剂盒   96T/48T

小鼠心肽(ANP)试剂盒   96T/48T

小鼠心肌转录因子GATA4试剂盒   96T/48T

小鼠心肌营养素1(CT-1)试剂盒   96T/48T

KNG1重组小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 蛋白 Protein

Beta-Amyloid 1-42 CT β淀粉样肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β淀粉样肽 1-42 (C端多肽)

SCN3B重组人 SCN3B 蛋白 (Fc 标签) Protein

ITGA6 & ITGB1 Protein Human 重组人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

SLC3A2 Protein Rat 重组大鼠 SLC3A2 / CD98 蛋白

CL-0385MFC-GFP(小鼠前胃癌细胞(绿色荧光蛋白标记))  THP 1细胞，单核细胞型淋巴瘤细胞 人前列腺癌细胞高转移亚系,PC-3M 2B4细胞 人结膜成纤维细胞总RNAHConF NA  HuT78细胞，T淋巴细胞白血病细胞 恶性黑色素瘤, 小鼠原代胎盘间充质干细胞 兔原代主动脉平滑肌细胞

大鼠胚胎成纤维原代细胞RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta 0.5mgRAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 维受体-β抗原

ALPP Protein Human 重组人 Alkaline phosphatase / ALPP 蛋白 (His 标签)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

FN1 Protein Human 重组人 Fibronectin / Fibronectin Fragment 2 蛋白 (His 标签)

KLK7重组人 KLK7 / PRSS6 蛋白 (His 标签) Protein