大鼠口腔黏膜成纤维原代细胞

大鼠口腔黏膜成纤维原代细胞

大鼠口腔黏膜成纤维细胞分离自口腔黏膜组织；口腔(oral cavity)是消化道的起始部分。前借口裂与外界相通，后经咽峡与咽相续。口腔内有牙、舌等器官。口腔的前壁为唇、侧壁为颊、顶为腭、口腔底为黏膜和肌等结构。口腔借上、下牙弓分为前外侧部的口腔前庭(oral vestibule)和后内侧部的固有口腔(oral cavity proper)；当上、下颌牙咬合时，口腔前庭与固有口腔之间可借第三磨牙后方的间隙相通。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

产品名称：大鼠口腔黏膜成纤维细胞

组织来源：口腔黏膜

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠口腔黏膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的优良培养状态。

方法简介

实验室分离的大鼠口腔黏膜成纤维采用 - 胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠口腔黏膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

兔子胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA 试剂盒

Rat angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 大鼠血管生成素1(ANG-1)试剂盒

Humaheumatoidfactor,RFELISAKit 人类风湿因子(RF)试剂盒 进口分装

HumancytosolicphospholipaseA2,cPLA2试剂盒人胞浆型0脂酶A2(cPLA2)试剂盒

组织IGF-1R激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

Humanplateletactivatingfactor，PAFELISAKit人血小板活化因子(PAF)试剂盒

小鼠胃泌素(GT)试剂盒 96T/48T

Human phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 人0脂酶A2(PL-A2)试剂盒

HumanAmylaseELISAKit 人(Amylase)试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenIerleukin17,IL-17试剂盒鸡白介素17(IL-17)试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞FSH-BETA蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)试剂盒规格：96T/48T

人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISAKit   ELISA. 

人葡萄糖激酶(GCK)ELISAKit   ELISA. 

人单胺氧化酶(MAO)ELISAKit   ELISA.

CD86重组大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein

IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

HDAC8 Protein Mouse 重组小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

CDH2 Others Human 人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人细胞裂解液   CHO(仓鼠细胞)     人间充质干细胞-肝  中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-E1  人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H1975  MFC 小鼠胃癌细胞 小鼠原代牙龈上皮细胞 人原代椎体终板软骨细胞

大鼠口腔黏膜成纤维原代细胞胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3)

CDH12 Protein Human 重组人 Cadherin-12 / CDH12 蛋白

FCN1重组人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 蛋白 Protein

FABI Protein E. coli 重组大肠杆菌 Enoyl-ACP Reductase / FABI 蛋白

HA重组甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein