大鼠精原原代细胞

大鼠精原原代细胞

大鼠精原细胞分离自睾丸组织；睾丸呈微扁的卵圆形，表面光滑，覆盖着鞘膜脏层；深部是质地坚韧的白膜，在睾丸后缘增厚并进入睾丸，形成睾丸纵膈，纵膈发出许多睾丸小隔深入睾丸实质，将实质分为睾丸小叶，数量约为100～200。每个小叶内约有2～4条生精小管，具有产生精子的作用；生精小管之间的结缔组织中有睾丸间质细胞，具有产生雄激素的作用。生精小管首先汇合成为精直小管(也称直精小管)，精直小管进入睾丸纵膈形成睾丸网，之后睾丸网发出12～15条输出小管通过睾丸后上缘进入附睾。生精小管的生精上皮是精子产生的地方，由生精细胞和支持细胞构成，成人的生精小管有30～70cm长。精子的产生过程包括生精细胞的分化、支持细胞的作用、雄激素的调节等。生精细胞并不是一种细胞，它是多种细胞的统称，包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、精子。前者依次发育分化为后者，且依次从生精上皮的基部到管腔面排列，最终形成精子进入到管腔之中，并借助生精上皮外侧的肌样细胞的收缩作用向下一级管腔移动。精原细胞是指由睾丸精子管上皮的原始生殖细胞经过多次有丝分裂而形成的细胞。原始的胚细胞经分化形成精原细胞，精原细胞经复制形成初级精母细胞，初级精母细胞经过减数第一次分裂后形成次级精母细胞，再经过减数第二次分裂形成精细胞。精细胞经过变形最终形成精子。精原细胞属于雄性生殖细胞的早期发育阶段，能不断地进行有丝分裂，增加细胞数量，并分化为精母细胞。精原细胞贴近基膜，细胞呈圆形，核大而圆，梁色深。精原细胞在男性的一生中具有几乎无限分裂的能力，而且分裂过程中能够保持原有的基因性状不变。在增殖过程中，通过精原细胞的分裂和分化，由精原细胞产生精母细胞，进入成熟分裂，因而通过增殖可大大增加精母细胞的数量。按理论推算，一个精原细胞通过数次细胞分裂，可形成上百个初级精母细胞。但在生精过程早期，生精细胞很易发生变性，故实际上少于这个数字。在精原细胞的增殖过程中，有一部分Ad型精原细胞不再继续分裂，而是保留下来，成为新的精原干细胞，因此通过增殖不仅能使精原干细胞不断得到更新，且能使精原干细胞保持一定数量，从而使精子的产生持续地进行下去，不会枯竭。

产品名称：大鼠精原细胞

组织来源：睾丸

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基：含FBS、生长添加剂、GDNF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：圆形、椭圆形

传代特性：可传2-3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠精原细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的优良培养状态。

方法简介

实验室分离的大鼠精原采用混合酶多步消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠精原经AP(碱性磷酸酶)免疫组化染色鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA 试剂盒

Rat angiogenin (ANG) ELISA Kit 大鼠血管生长素(ANG)试剂盒

Humanadrenalcoexaibody,ACAELISAKit 人肾上腺皮质抗体(ACA)试剂盒 进口分装

HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMW试剂盒人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)试剂盒

组织HSV1(HERPESSIMPLX1)病毒定性试剂盒20次

Humanplateletbasicprotein,PBPELISAKit人血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)试剂盒

猪白介素1α(IL-1α)ELISA 试剂盒

Human ai Q thermal aibody (ai-Q-Ab) ELISA Kit 人抗Q热抗体(ai-Q-Ab)试剂盒

PorcineIerleukin1,IL-1ELISAKit 猪白介素1(IL-1)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAKA(HumanAi-keratinaibody)ELISAKit人抗角蛋白抗体

血液尿酸含量酶偶联比色法定量试剂盒20次

MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISAKit小鼠高敏三甲状腺原(u-T3)试剂盒

人抗糖蛋白抗体(GP)ELISAKit   ELISA. 

人抗单核细胞抗体(AMA)ELISAKit   ELISA. 

人氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISAKit   ELISA.

CLMP重组大鼠 ASAM / CLMP 蛋白 Protein

GFRA4 ( Persephin receptor 0.5mgGFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4) GDNF家族受体α-4(抗原)

SORCS1重组人 SorCS1 蛋白 Protein

IL2RG Protein Human 重组人 IL2RG / CD132 蛋白 (Fc 标签)

IL2RA Protein Mouse 重组小鼠 IL2RA / CD25 蛋白

CDH2 Others Human 人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人细胞裂解液   CD200R1 Others Mouse 小鼠 CD200R1 人细胞裂解液   肾系膜细胞Many types of cells包装：5 ×105次方(1ml)  滋养层细胞TM-prf  CD28 Others Mouse 小鼠 CD28 人细胞裂解液   EAC 小鼠艾氏腹水癌细胞 小鼠原代牙周膜成纤维细胞 兔原代睾丸间质细胞

大鼠精原原代细胞甘露聚糖结合凝集素关联丝蛋白酶2(MASP2)重组蛋白 Recombinant Mannose Associated Serine Protease 2 (MASP2)

IL5RA Protein Human 重组人 IL5Ra / CD125 蛋白

PTK6重组小鼠 PTK6 / Brk 蛋白 (His & GST 标签) Protein

FCGR2B Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签)

ERBB3重组人 HER3 / ErbB3 蛋白 (Fc 标签) Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。