大鼠结肠平滑肌原代细胞

大鼠结肠平滑肌原代细胞

大鼠结肠平滑肌细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M"，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠平滑肌细胞主要分布于黏膜肌层和肌层的内环形、外纵行平滑肌；结肠运动少而缓慢，对刺激的反应也较迟缓。结肠平滑肌在食物消化与吸收、肠道运动和物质分泌、诱发全身炎症反应以及细胞内信号转导途径等研究中起着重要的作用。结肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。结肠平滑肌运动活性受到神经递质、胃肠激素和药物等因素的调节。随着现代胃肠动力学研究的进展，对胃肠运动的研究已从器官、组织水平发展到细胞、分子水平，要求在胃肠道单个平滑肌细胞标本上来完成各种电生理、药理和分子生物学等实验。体外培养细胞，由于影响因素单一，是研究细胞功能以及相应的细胞信号转导机制的基础。

产品名称：大鼠结肠平滑肌细胞

组织来源：结肠组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠结肠平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠结肠平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

豚鼠白介素1β(IL1B)试剂盒 ，英文名： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素结合酶(E2/UBCE)试剂盒

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人绒毛膜β

细菌乙醇脱氢酶总活性(NDMA)比色法定量试剂盒20次

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)试剂盒规格：96T/48T

猪白介素2(IL-2)ELISA 试剂盒

Human ai IVIgG aibody ELISA Kit 人抗IVIgG抗体试剂盒

Porcineiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit 猪细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)试剂盒 进口分装

CLIAKitforALB(Humanmicroalbunminuria)ELISAKit人尿微量白蛋白

血液(UROKINASE)活性荧光定量试剂盒20次

MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1,VEGFR-1/Flt1ELISAKit小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)试剂盒

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小鼠心肌营养素试剂盒   小鼠心肌营养素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠心肌营养素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠心肌营养素试剂盒、小鼠心肌营养素试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠心肌肌钙蛋白试剂盒   小鼠心肌肌钙蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠心肌肌钙蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠心肌肌钙蛋白试剂盒、小鼠心肌肌钙蛋白试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠小扁结合型甲胎蛋白异质体试剂盒   小鼠小扁结合型甲胎蛋白异质体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠小扁结合型甲胎蛋白异质体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠小扁结合型甲胎蛋白异质体试剂盒、小鼠小扁结合型甲胎蛋白异质体试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

LAYN重组人 Layilin / LAYN 蛋白 (Fc 标签) Protein

糖蛋白130(gp130)重组蛋白 Recombinant Glycoprotein 130 (gp130)

CLEC2B重组人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL22RA2 Protein Human 重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白 (His & Fc 标签)

HA Protein H1N2 重组甲型流感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

CDC37 Others Mouse 小鼠 CDC37 / CDC37A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液   CSNK1A1 Others Human 人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液   腮腺细胞Many   主动脉平滑肌细胞Many 小鼠原代羊膜间充质干细胞 兔原代视网膜muller细胞

大鼠结肠平滑肌原代细胞NPY ( Neuropeptide Y 0.5mgNPY ( Neuropeptide Y)1-36 神经肽 Y(1-36多肽)

IL6ST Protein Human 重组人 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白

CXCL16重组狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (Fc 标签) Protein

TSPAN7 Protein Mouse 重组小鼠 TALLA-1 / TSPAN7 蛋白

CNDP2重组人 CNDP2 / CPGL / PEPA 蛋白 Protein