大鼠角膜内皮原代细胞

大鼠角膜内皮原代细胞

大鼠角膜内皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞（CEC）在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵"功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na+-K+-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na+梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态，维持透明性。

产品名称：大鼠角膜内皮细胞

组织来源：眼角膜组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠角膜内皮采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠角膜内皮经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

豚鼠白介素22(IL-22)试剂盒 ，英文名： IL-22 ELISA Kit

Human ubiquitin protein (Ub) ELISA Kit 人泛素蛋白(Ub)试剂盒

RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit 兔子白介素1β(IL-1β)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EP(RabbitBeta-Endorphin)ELISAKit兔子β内啡肽

细菌样品二维电泳裂解液用于细菌蛋白二维电泳

RabbitGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit兔糖化血红蛋白A1c(A1c)试剂盒规格：96T/48T

豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒 ，英文名： SOD ELISA Kit

Human polymorphonuclear leukocyte elastase (PMN Elastase) ELISA Kit 人多形核白细胞弹性蛋白酶(PMN Elastase)试剂盒

rabbitCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit 兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBetaGD(MouseBeta-glucuronidase)ELISAKit小鼠β葡萄糖酸苷酶

细菌纤维素酶(cellulase)活性荧光定量试剂盒20次

RabbitHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit兔子高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)试剂盒规格：96T/48T

人脂肪型脂肪酸结合蛋白试剂盒试剂盒   人脂肪型脂肪酸结合蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   人脂肪型脂肪酸结合蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人脂肪型脂肪酸结合蛋白试剂盒、人脂肪型脂肪酸结合蛋白试剂盒试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人细胞外基质0酸糖蛋白试剂盒   人细胞外基质0酸糖蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   人细胞外基质0酸糖蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人细胞外基质0酸糖蛋白试剂盒、人细胞外基质0酸糖蛋白试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人髓样分化因子初次应答基因88试剂盒   人髓样分化因子初次应答基因88试剂盒   规格型号：96T/48T   人髓样分化因子初次应答基因88试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人髓样分化因子初次应答基因88试剂盒、人髓样分化因子初次应答基因88 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人丝酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G试剂盒   人丝酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G试剂盒   规格型号：96T/48T   人丝酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人丝酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G试剂盒、人丝酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

FGF1重组人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

结合球蛋白(CBG)重组蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

SMR3B重组人 SMR3B 蛋白 (Fc 标签) Protein

CDK1 Protein Human 重组人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

PLA2G12B重组小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 蛋白 (His 标签) Protein

2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白 1mg2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白

USP46重组人 / 小鼠 USP46 蛋白 (N-SUMO) Protein

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 标签)

LTBR Protein Rat 重组大鼠 LTBR / ହ䎨ହ

大鼠角膜内皮原代细胞CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 环腺苷酸应答元件结合蛋白(抗原)

AK1 Protein Human 重组人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 标签)

CD274重组大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 标签) Protein

NTRK3 Protein Mouse 重组小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 标签)

CSF3R重组人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 标签) Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。