大鼠肌腱成纤维原代细胞

大鼠肌腱成纤维原代细胞

大鼠肌腱成纤维细胞分离自肌腱组织；肌腱是肌腹两端的索状或膜状致密结缔组织，便于肌肉附着和固定。一块肌肉的肌腱分附在两块或两块以上的不同骨上，是由于肌腱的牵引作用才能使肌肉的收缩带动不同骨的运动。每一块骨骼肌都分成肌腹和肌腱两部分，肌腹由肌纤维构成，色红质软，有收缩能力，肌腱由致密结缔组织构成，色乳白较硬，没有收缩能力。肌腱把骨骼肌附着于骨骼。长肌的肌腱多呈圆索状，阔肌的肌腱阔而薄，呈膜状，又叫腱膜。此处的肌腹即为通常所说的红肌，而肌腱即为白肌，分别控制肌肉的力量、爆发力和耐力。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

产品名称：大鼠肌腱成纤维细胞

组织来源：肌腱组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠肌腱成纤维采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肌腱成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

小鼠B6(VB6)ELISA 试剂盒

Rat bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)试剂盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinbeta,C/ELISAKit 人CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)试剂盒 进口分装

ChickenLipopolysaccharides,LPS试剂盒鸡脂多糖/内毒素(LPS)试剂盒

载玻片细胞MAPK蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃肠癌标志物CA199试剂盒

豚鼠脑源性神经营养因子(BDNF)试剂盒 ，英文名： BDNF ELISA Kit

Human paraneoplastic pemphigus aibody (PNP) ELISA Kit 人副性天疱疮抗体(PNP)试剂盒

rabbitImmunoglobulinE,IgEELISAKit 兔子免疫球蛋白E(IgE)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBALPELISAKit大鼠骨碱性0酸酶

线虫β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒50次

Rabbitcholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit兔子酯转移蛋白(CETP)试剂盒规格：96T/48T

人组织因子(TF)试剂盒   96T/48T

人组织型纤维溶酶激活物（t-PA）试剂盒   96T/48T

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)试剂盒   96T/48T

人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因D（MICD）试剂盒   96T/48T

PTK6重组小鼠 PTK6 / Brk 蛋白 (His & GST 标签) Protein

甘露聚糖结合凝集素关联丝蛋白酶2(MASP2)重组蛋白 Recombinant Mannose Associated Serine Protease 2 (MASP2)

ERBB3重组人 HER3 / ErbB3 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL5RA Protein Human 重组人 IL5Ra / CD125 蛋白

FCGR2B Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签)

CCL17 Protein Human 重组人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 (His 标签)  Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256 胶质瘤细胞，U251细胞 WEHI 231细胞，小鼠B淋巴细胞  人胚肺成纤维细胞;IMR-90  B16细胞，黑色素瘤细胞 小鼠原代主动脉内皮细胞 小鼠原代乳腺上皮细胞

大鼠肌腱成纤维原代细胞Ⅹ(F10)重组蛋白 Recombinant Coagulation Factor X (F10)

ALOX5AP Protein Human 重组人 ALOX5AP / FLAP 蛋白 (His 标签)

IL8重组人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 标签) Protein

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

EFNA4重组人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白  Protein