大鼠海绵体平滑肌原代细胞

大鼠海绵体平滑肌原代细胞

大鼠海绵体平滑肌细胞分离自海绵体组织；海绵体，又称海绵体肌，是最硬的平滑肌和结缔组织。海绵体是一种勃起组织，外面包有坚厚的白膜，内部由结缔组织和平滑肌组成海绵状支架，其腔隙与血管相通。它主要包括海绵体内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞3种细胞成分。其中平滑肌细胞和成纤维细胞镶嵌于海绵体细胞外基质的胶原中，在消化海绵体组织时，胶原酶的作用主要是松解海绵体内皮细胞与基膜的联系，破坏海绵体内皮细胞间的紧密连接。因此可用胶原酶分离出海绵体平滑肌细胞。平滑肌，是非横纹肌的肌肉组织。分布在人体动脉和静脉血管壁、膀胱、子宫、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫状肌和虹膜。平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

产品名称：大鼠海绵体平滑肌细胞

组织来源：海绵体组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠海绵体平滑肌采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠海绵体平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

小鼠α干扰素(IFN-α)ELISA 试剂盒

Rat aquaporin 1 (AQP-1) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)试剂盒

HumanNeonatalThyroidStimulatingHormone,N-TSHELISAKit 人新生儿促甲状腺素(N-TSH)试剂盒 进口分装

HumanChorionicGonadoophinβ,β-CG试剂盒人绒毛膜β(β-CG)试剂盒

总微型RNA(miRNA)超滤法分离试剂盒10次

HumanSalusinαELISAKit人Salusin-α试剂盒

植物渗调蛋白(Osmotins)试剂盒

Human ai glucoprotein 210 (gp210) ELISA Kit 人抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)试剂盒

PorcineInsulin,INSELISAKit 猪胰岛素(INS)试剂盒 进口分装

CLIAKitforaFGF-1ELISAKit大鼠酸性成纤维细胞生长因子1

血液血管紧张素Ⅰ转化酶2(ACE2)活性比色法定量试剂盒20次

Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)试剂盒

脂褐质测试盒   Lipfuscin test box

脂蛋白（a）[LP（a）]测试盒   Lipoprotein (a) [LP (a)] test case

游离脂肪酸（NEFA）测试盒   Free fatty acid (NEFA) test case

脂肪酶测试盒   Lipase test kit

TNFSF11重组人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 Protein

T4-BSA 甲状腺素T4偶联牛血清白蛋白 1mgT4-BSA 甲状腺素T4偶联牛血清白蛋白

FLT3重组人 FLT-3 / CD135 / FLK-2 蛋白 (His 标签) Protein

AKT2 Protein Human 重组人 AKT2 / protein kinase B β / PKB beta 蛋白 (His & GST 标签)

PLAT Protein Human 重组人 tPA / PLAT 蛋白

C7 Others Human 人 C7 / Compleme compone 7 人细胞裂解液   ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞)  CL-0263BGC-803(人胃癌细胞) 猫肾细胞;F81  CL-0065CoC1/DDP(人卵巢耐药细胞亚株) 小鼠原代子宫内膜上皮细胞 小鼠原代海马神经元细胞

大鼠海绵体平滑肌原代细胞催乳素(PRL)重组蛋白 Recombinant Prolactin (PRL)

IL2 Protein Human 重组人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

WIF1重组小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 Protein

NT5E Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白

BTK重组人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 Protein