大鼠海绵体内皮原代细胞

大鼠海绵体内皮原代细胞

大鼠海绵体内皮细胞分离自海绵体组织；阴茎海绵体是由海绵状的小梁和腔隙构成的血窦结构，它主要包括海绵体内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞3种细胞成分。其中平滑肌细胞和成纤维细胞镶嵌于海绵体细胞外基质的胶原中，而海绵体内皮细胞则覆盖于海绵体血窦的腔面，仅占海绵体组织的2.8%。在消化海绵体组织时，胶原酶的作用主要是松解海绵体内皮细胞与基膜的联系，破坏海绵体内皮细胞间的紧密连接。如果消化时间延长或胶原酶浓度过大，平滑肌细胞和成纤维细胞也将被消化下来，从而影响海绵体内皮细胞的纯度。因此，比较筛选合适的胶原酶浓度和消化时间是成功分离海绵体内皮细胞的关键。

产品名称：大鼠海绵体内皮细胞

组织来源：海绵体组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠海绵体内皮采用混合酶消化法结合机械分离法、并用内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠海绵体内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA 试剂盒

Human vitamin E (VE) ELISA Kit 人(VE)试剂盒

Humanplacetallactogen,PLELISAKit 人胎盘泌乳素(PL)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancholineacetylase,CHAc试剂盒人乙酰化酶(CHAc)试剂盒规格：96T/48T

总RNA样品mRNA选择化试剂盒10次

humanschistosomaELISAKit人血吸虫(schistosoma)试剂盒规格：96T/48T

植物A(VA)ELISA 试剂盒

Human ai nuclear aibody (ANA) ELISA Kit 人抗核抗体(ANA)试剂盒

Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISAKit 猪血小板活化因子(PAF)试剂盒 进口分装

CLIAKitforaFGF-1(Humanacidicfibroblastgrowthfactor1)ELISAKit人酸性成纤维细胞生长因子1

血液血管紧张素Ⅰ转化酶1(ACE1)活性荧光共振能量转移法(FRET)定量试剂盒20次

MouseterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit小鼠末端补体复合物C5b-9(TCCC5b-9)试剂盒

直链淀粉   250mg

Amylose,fromPotato   1g

抗蛋白酶   250mg

Aipain,Dihydrochloride   1g

IL1RAPL1重组人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein

抑制素βE(INHβE)重组蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)

HA重组甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 标签)

GFP Protein Aequorea victoria 重组水母 GFP 蛋白

C6大鼠胶质瘤细胞 C6 rat glioma cell DMEM+10% FBS  小鼠小梁网细胞   蚊子幼虫体细胞;Aedes albopictus clone C6/36 人肺癌细胞，NCI-H1299细胞 A-431(表皮癌细胞)  中国仓鼠肺细胞;V79  COS-7 非洲绿猴SV40 小鼠原代子宫平滑肌细胞 兔原代中耳上皮细胞

大鼠海绵体内皮原代细胞BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein 0.5mgBCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐药相关蛋白(抗原)

IL1RL1 Protein Human 重组人 IL1RL1 / ST2 蛋白 (isoform a, His 标签)

MDGA2重组小鼠 MDGA2 / MAMDC1 蛋白 Protein

CD40LG Protein Rat 重组大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)

LRP10重组人 LRP10 蛋白 Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。