大鼠骨髓间充质干原代细胞

大鼠骨髓间充质干原代细胞

大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓基质系统内存在的骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核细胞总数的0.001%-0.1%，含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。

产品名称：大鼠骨髓间充质干细胞

组织来源：骨髓

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠骨髓间充质干采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠骨髓间充质干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

小鼠肝细胞生长因子受体(HGFR/ c-MET)试剂盒

Human varicella zoster virus IgG (VZV-IgG) ELISA Kit 人水痘带状疱疹病毒IgG(VZV-IgG)试剂盒

HumanAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit 人抗Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-ophoblastaibody,ATA试剂盒人抗滋养膜细胞抗体(ATA)试剂盒规格：96T/48T

植物氧化应激活性氧(ROS)比色法定量试剂盒(超氧阴离子)20次

Humanansferfactor，TFELISAKit人转移因子(TF)试剂盒规格：96T/48T

猪催乳素(PRL)试剂盒

Human macrophage chemotatic factor (MCF) ELISA Kit 人巨噬细胞趋化因子(MCF)试剂盒

Porcinemyeloperoxidase,MPOELISAKit 猪髓过氧化物酶(MPO)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha1-AGP(HumanAlpha1-Acidglycoprotein)ELISAKit人α1酸性糖蛋白

血液0酸二酯酶2(PDE2)活性荧光定量试剂盒10次

Mouseβ2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M,β2-GP1IgA/G/MELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)试剂盒

人粘蛋白5AC(MUC5AC)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MUC5AC (Mucin 5 Subtype AC) ELISA Kit

人粘蛋白5B(MUC5B)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MUC5B (Mucin 5 Subtype B) ELISA Kit

人粘蛋白7(MUC7)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MUC7 (Mucin 7) ELISA Kit

人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MEC/CCL28 (Mucosae Associated Epithelia Chemokine) ELISA Kit

IL25重组人 IL25 蛋白 (Fc 标签) Protein

衰变加速因子(DAF)重组蛋白 Recombinant Decay Accelerating Factor (DAF)

EIF5A重组人 EIF5A 蛋白 Protein

IL1RL1 Protein Human 重组人 IL1RL1 / ST2 蛋白

HA Protein H4N6 重组甲型流感 H4N6 (A/mallard/Ohio/657/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

BRL细胞，肝细胞 人前列腺癌细胞,9L-E细胞 人上皮细胞RNAHMEpiC miRNA5 μg  YAC-1(小鼠淋巴瘤细胞)     RL95-2, 人子宫内膜腺癌细胞系 羊膜细胞,H.A.细胞 WERI-Rb-1(人视网膜母细胞瘤)  EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM0501 羊原代附睾上皮细胞 兔原代乳腺导管上皮细胞

大鼠骨髓间充质干原代细胞饥饿素-O-乙酰基转移酶(GOAT)重组蛋白 Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)

AIM2 Protein Human 重组人 AIM2 蛋白 (GST 标签)

OPCML重组小鼠 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 标签) Protein

CX3CL1 Protein Canine 重组狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白

IL12A & IL27B重组人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白 Protein