大鼠骨骼肌原代细胞

大鼠骨骼肌原代细胞

大鼠骨骼肌细胞分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞，细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

产品名称：大鼠骨骼肌细胞

组织来源：骨骼肌组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介

公司实验室分离的大鼠骨骼肌采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠骨骼肌经α-Sarcometric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

小鼠降钙素原(PCT)ELISA 试剂盒

People mumps virus IgG ELISA Kit 人腮腺病毒IgG 试剂盒

HumanmembraneIgD,mIgDELISAKit 人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgM试剂盒人抗巨细胞病毒抗体IgM(ai-CMVIgM)试剂盒规格：96T/48T

植物基因组DNA化试剂盒(高多糖/酚)50次

Humanα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit人内皮型合成酶3(eNOS-3)试剂盒规格：96T/48T

豚鼠泛素(Ub)试剂盒 ，英文名： Ub ELISA Kit

Human calreticulin (C) ELISA Kit 人钙网蛋白(C)试剂盒

rabbitProstaglandinE1,PGE1ELISAKit 兔子前列腺素E1(PGE1)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforB7-2/sCD86(HumansolubleClusterofdiffereiation86)ELISAKit人可溶性CD86

线虫甲磺酸乙脂诱导突变试剂盒10次

RabbitB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit兔子B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)试剂盒规格：96T/48T

小鼠糖皮质类固醇受体试剂盒   小鼠糖皮质类固醇受体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠糖皮质类固醇受体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠糖皮质类固醇受体试剂盒、小鼠糖皮质类固醇受体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠横纹肌辅肌动蛋白试剂盒   小鼠横纹肌辅肌动蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠横纹肌辅肌动蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠横纹肌辅肌动蛋白试剂盒、小鼠横纹肌辅肌动蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1试剂盒   豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1试剂盒、豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒   豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠主要组织相容性复合体试剂盒、豚鼠主要组织相容性复合体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

ITK重组小鼠 ITK Kinase 蛋白 (aa 351-619, His & GST 标签) Protein

簇集蛋白(CLU)重组蛋白 Recombinant Clusterin (CLU)

MBL2重组人 MBL2 / MBL / COLEC1 蛋白 Protein

IL21 Protein Human 重组人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白

CD83 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD83 蛋白 (Fc 标签)

Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)  人淋巴成纤维细胞HLF  DLD-1(人结肠腺癌细胞)     ICAM1 Others Mouse 小鼠 ICAM-1 / CD54 人细胞裂解液   恒河猴肾细胞;LLC-MK2  EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0904 羊原代呼吸道上皮细胞 猪原代鼻腔粘膜上皮细胞

大鼠骨骼肌原代细胞CK19 细胞角蛋白19多肽抗原 0.5mgCK19 细胞角蛋白19多肽抗原

AFP Protein Human 重组人 AFP / alpha-fetoprotein 蛋白 (His 标签)

IL25重组小鼠 IL25 蛋白 (His 标签) Protein

MME Protein Mouse 重组小鼠 CD10 / Neprilysin / MME 蛋白 (His 标签)

LMAN2重组人 LMAN2 / VIP36 蛋白 (His 标签) Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。