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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
实验室分离的大鼠肺微血管平滑肌采用混合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测
实验室分离的大鼠肺微血管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 大鼠肺微血管平滑肌原代细胞 | 组织来源 | 肺 |
英文名称 | Rat Pulmonary Microvascular Smooth Muscle Cells | 货号 | YS-01X8225 |
产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
大鼠肺微血管平滑肌细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。肺血管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。肺血管平滑肌细胞主要功能：①细胞表面表达介质（ICAM-1和VCAM-1）参与血管壁炎症反应；②是多数重要动脉疾病的靶细胞。肺血管平滑肌细胞与主要病生理变化：①平滑肌增生易致肺动脉高压；②先天性肺动脉狭窄；③肺动脉栓塞。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素，最新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关。
培养信息：
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传2-3代左右
消化液：0.25%
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
大鼠肺微血管平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的优良培养状态。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
小鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA 试剂盒
Rat basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 大鼠碱性成纤维生长因子(bFGF)试剂盒
HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit 人复制蛋白A(RPA-70)试剂盒 进口分装
Human5-Nucleotidase,5-试剂盒人5核苷酸酶(5-)试剂盒
真菌天青曙红(Azure-eosinate)染色试剂盒50次
Mouseai-oligodendrocyte-myelinglycoproteinaibody,OMgp-AbELISAKit小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体(OMgp-Ab)试剂盒
猪补体蛋白3(C3)ELISA 试剂盒
Human Legionella aigen (LP Ag) ELISA Kit 人军团菌抗原(LP Ag)试剂盒
PorcinecardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit 猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)试剂盒 进口分装
CLIAKitforALG(Humanai-lymphocyteglobulin)ELISAKit人抗淋巴细胞球蛋白
血液卵0脂乙酰转移酶(LCAT)活性荧光定量试剂盒20次
MouseVitaminC,VCELISAKit小鼠C(VC)试剂盒
猪α葡萄糖苷酶（α-Glu）试剂盒 试剂盒 组装/原装
猪α干扰素(IFN-α)试剂盒 试剂盒 组装/原装
猪α干扰素(IFN-α)试剂盒 试剂盒 组装/原装
猪S-100B蛋白（S-100B）试剂盒 试剂盒 组装/原装
HA重组甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein
PAX8(Paired box gene 8 0.5mgPAX8(Paired box gene 8) 配对盒基因8抗原
TRIB3重组人 TRIB3 / TRB3 蛋白 (GST 标签) Protein
AFM Protein Human 重组人 AFM / Afamin 蛋白 (His 标签)
BMPR1A Protein Human 重组人 BMPRIA / ALK-3 / CD292 蛋白 (His & Fc 标签)
ADIPOQ Protein Mouse 重组小鼠 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (His 标签) 大鼠肾系膜细胞 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆); EPO-CHO-T PC9-EGFP-puro(慢病毒构建稳定株)人肺癌细胞 PC9-EGFP-puro 猪原代鼻腔粘膜上皮细胞 大鼠原代心肌干细胞
大鼠肺微血管平滑肌原代细胞硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)重组蛋白 Recombinant Thioredoxin Reductase 1 (TrxR1)
ACPL2 Protein Human 重组人 ACPL2 蛋白 (His 标签)
CNDP1重组人 CNDP1 蛋白 (His 标签) Protein
NA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Thailand/1 (KAN-1) /2004) 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (His 标签)
RAB6A重组人 Rab6 / Rab GTPases / RAB6A 蛋白 (His 标签) Protein
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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