大鼠肺动脉平滑肌原代细胞

大鼠肺动脉平滑肌原代细胞

大鼠肺动脉平滑肌细胞分离自肺动脉组织；肺动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺动脉起于右心室，在主动脉之前向左上后方斜行，在主动脉弓下方分为左、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左、右肺动脉。左肺动脉较短，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上、下叶。右肺动脉较长而粗，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行，至右肺门处分为三支进入右肺上、中、下叶。肺动脉平滑肌细胞是肺血管的重要结构细胞之一，在调控肺血管的收缩和舒张功能中有重要作用。肺动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。肺动脉平滑肌细胞的异常是肺动脉高压发生发展的重要病理学特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的关键。研究表明，急性和慢性缺氧均可导致肺动脉高压，即缺氧性肺动脉高压，推断缺氧可能是通过促进肺动脉平滑肌细胞的增殖而参与缺氧性肺动脉高压的发生发展。肺动脉平滑肌细胞主要功能：①细胞表面表达介质（ICAM-1和VCAM-1）参与血管壁炎症反应；②是多数重要动脉疾病的靶细胞。肺动脉平滑肌细胞与主要病生理变化：①平滑肌增生易致肺动脉高压；②先天性肺动脉狭窄；③肺动脉栓塞。

产品名称：大鼠肺动脉平滑肌细胞

组织来源：肺动脉

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠肺动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的优良培养状态。

方法简介

实验室分离的大鼠肺动脉平滑肌采用蛋白酶 - 胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠肺动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

小鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 试剂盒

People of coicosterone / coicosterone (CO) ELISA Kit 人皮质酮/肾上腺酮(CO)试剂盒

HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 人酰化刺激蛋白(ASP)试剂盒 96T/48T 进口分装

Human8-isoprostaglandin,8-iso-PG试剂盒人8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒规格：96T/48T

正常大鼠(SpragueDawley)肾组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-IgEreceptoraibodyELISAKit小鼠抗IgE受体抗体试剂盒规格：96T/48T

猪胆囊收缩素/肠促肽(CCK)ELISA 试剂盒

Human macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)试剂盒

Porcinemelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISAKit 猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha1-MGELISAKit大鼠α1微球蛋白

血液0酸二酯酶1(PDE1)活性酶连续循环光谱法定量试剂盒10次

Mouseβ-galactosidase,βGALELISAKit小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)试剂盒

小鼠细胞凋亡因子 (mouse Fas)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠细胞凋亡因子配体 (mouse Fas-Ligand)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

mouse Flt3 Ligand   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠粒细胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

reMOG 1-125 protein 重组髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白1-125 500ugreMOG 1-125 protein 重组髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白1-125

IL12A重组人 IL12A / NKSF1 蛋白 (His 标签) Protein

ADPRH Protein Human 重组人 ADPRH / ARH1 蛋白 (His 标签)

CSF3 Protein Human 重组人 G-CSF / CSF3 蛋白

ACVRL1 Others Mouse 小鼠 ALK-1 人细胞裂解液   HuH-6(人肝母细胞瘤细胞)     MET Others Human 人 c-MET / HGFR 人细胞裂解液   SHZ-88(大鼠癌细胞)   ACHN 人肾细胞腺癌细胞 猪原代肺微血管内皮细胞 小鼠原代颈动脉内皮细胞

大鼠肺动脉平滑肌原代细胞核糖体蛋白L23A(RPL23A)重组蛋白 Recombinant Ribosomal Protein L23A (RPL23A)

ACRV1 Protein Human 重组人 SP-10 / ACRV1 蛋白 (His 标签)

HAVCR2重组小鼠 TIM3 / HAVCR2 蛋白  Protein

ANGPTL7 Protein Canine 重组狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 蛋白 (His 标签)

TMED4重组人 TMED4 / ERS25 蛋白 (His 标签) Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。