大鼠肺大静脉平滑肌原代细胞

大鼠肺大静脉平滑肌原代细胞

大鼠肺大静脉平滑肌细胞分离自肺大静脉组织；肺大静脉在用肺呼吸的脊椎动物中，把动脉血由肺送回心脏的静脉，是一个静脉里流动脉血的血管。左右1对，共4条，两条连接右肺，两条连接左肺。肺静脉异位引流是指肺静脉未能直接与左心房连接，而与右心房或体静脉系统连接的先天性心血管异位。肺静脉淤血性肺动脉高压，是由于肺静脉内血液淤滞而引起的肺动脉高压。正常情况下，肺循环具有血压低、阻力小和顺应性大的特点，肺动脉压力高低取决于单位时间内肺动脉血流量和肺血管的阻力，要维持肺循环的低压、低阻的状态，必须保证整个肺循环系统的畅通无阻，血液顺利地由肺动脉经毛细血管进入肺静脉，再入左心室，经过左心室收缩进入体循环，才能避免肺动脉内压力升高。肺大静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。该细胞参与血管壁炎症反应，保持静脉管腔的通畅，还是多数动脉疾病的靶细胞。

产品名称：大鼠肺大静脉平滑肌细胞

组织来源：肺静脉组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

方法简介

普诺赛实验室分离的大鼠肺大静脉平滑肌采用 - 胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

普诺赛实验室分离的大鼠肺大静脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

小鼠能a1A受体(ADRA1A)ELISA 试剂盒

Kappa aibodies to human immunoglobulin light chain (-IgLC) ELISA Kit 轻链kappa抗体(κ-IgLC)试剂盒

HumanleucocyteaigenB27,HLA-B27ELISAKit 人类白细胞抗原B27(HLA-B27)试剂盒 96T/48T 进口分装

FishhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRP试剂盒鱼类超敏C反应蛋白(hs-CRP)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量试剂盒20次

MouseComplemefragme3a,C3aELISAKit小鼠补体片断3a(C3a)试剂盒规格：96T/48T

小鼠B6(VB6)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)试剂盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinbeta,C/EBPβELISAKit 人CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenLipopolysaccharides,LPS试剂盒鸡脂多糖/内毒素(LPS)试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞MAPK蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃肠癌标志物CA199试剂盒规格：96T/48T

整合素α2β1   英文名称：   Iegrin α2β1   规格：      英文缩写：   Iegrin α2β1

整合素α5β3   英文名称：   Iegrin α5β3   规格：      英文缩写：   Iegrin α5β3

β-整合素   英文名称：   β-Iegrin   规格：      英文缩写：   β-Iegrin

诱导型合酶   英文名称：   induced niic oxide syhas   规格：      英文缩写：   iNOS

MERTK重组人 MERTK / Mer 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

铜蓝蛋白(CP)重组蛋白 Recombinant Ceruloplasmin (CP)

RPN2重组人 RPN2 / Ribophorin II 蛋白 (His 标签) Protein

AGO1 Protein Human 重组人 AGO1 / Argonaute 1 / EIF2C1 蛋白 (His 标签)

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Egypt/2321-NAMRU3/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)

ACVR2B Others Human 人 ACVR2B / ActivinR-IIB 人细胞裂解液   前列腺上皮细胞生长添加物PEpiCGS  DLL4 Others Mouse 小鼠 DLL4 / Delta4 人细胞裂解液   非洲绿猴肾细胞;VERO  LCC1 猪原代骨骼肌细胞 大鼠原代下丘脑神经元细胞

大鼠肺大静脉平滑肌原代细胞神经颗粒素(NRGN)重组蛋白 Recombinant Neurogranin (NRGN)

IL3RA Protein Human 重组人 IL3RA / CD123 蛋白 (His & Fc 标签)

FKBP1A重组人 FKBP12 蛋白 Protein

HA Protein Influenza 重组甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

LPAL2重组人 LPAL2 蛋白 (Fc 标签) Protein