大鼠大隐静脉平滑肌原代细胞

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细胞属性：

方法简介

公司实验室分离的大鼠大隐静脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠大隐静脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

大鼠大隐静脉平滑肌细胞分离自大隐静脉；大隐静脉起于足背静脉弓内侧端，经内踝前方，沿小腿内侧缘伴隐神经上行，经股骨内侧髁后方，进入大腿内侧部，与股内侧皮神经伴行，逐渐向前上，在耻骨结节外下方穿隐静脉裂孔，汇入股静脉，其汇入点称为隐股点。有5条属支：旋髂浅静脉、腹壁浅静脉、外静脉、股内侧浅静脉和股外侧浅静脉，它们汇入大隐静脉的形式多样，相互间吻合丰富。大隐静脉曲张行高位结扎时，须分别结扎、切断各属支，以防复发。大隐静脉平滑肌细胞主要功能：①血管平滑肌细胞的生长潜力是原发血管病发的重要异常因素；②参与血管壁的炎症反应，并与血管疾病的进展和稳定有关。因此，研究大隐静脉平滑肌细胞的代谢和信号通路是研究大隐静脉扩张等疾病的良好实验材料。大隐静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作步骤：

1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。

5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。

6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。

8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。

9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。

10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。

11. 镜检观察。

公司产品：

小鼠乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒

Human visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)试剂盒

HumanSurfactaProteinD,SP-DELISAKit 人表面活性蛋白D(SP-D)试剂盒 96T/48T 进口分装

guineapighepatocytegrowthfactor,HGF试剂盒豚鼠肝细胞生长因子(HGF)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量试剂盒20次

MouseCeruloplasmin,CP/CERELISAKit小鼠铜蓝蛋白(CP/CER)试剂盒规格：96T/48T

豚鼠催产素(OT)试剂盒 ，英文名： OT ELISA Kit

Human poly serum protein (PHSA) ELISA Kit 人多聚血清蛋白(PHSA)试剂盒

rabbitprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 兔子Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢ)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-LPH(HumanBeta-lipoopichormone)ELISAKit人β-促脂素

细菌细胞趋化作用(chemotaxis)软琼脂试剂盒10次

rabbitImmunoglobulinA,IgAELISAKit兔子免疫球蛋白A(IgA)试剂盒规格：96T/48T

人周期素依赖性激酶5试剂盒   人周期素依赖性激酶5试剂盒   规格型号：96T/48T   人周期素依赖性激酶5试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人周期素依赖性激酶5试剂盒、人周期素依赖性激酶5 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人周期素依赖性激酶4试剂盒   人周期素依赖性激酶4试剂盒   规格型号：96T/48T   人周期素依赖性激酶4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人周期素依赖性激酶4试剂盒、人周期素依赖性激酶4 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人周期素依赖性激酶2试剂盒   人周期素依赖性激酶2试剂盒   规格型号：96T/48T   人周期素依赖性激酶2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人周期素依赖性激酶2试剂盒、人周期素依赖性激酶2 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人周期素依赖性激酶1试剂盒   人周期素依赖性激酶1试剂盒   规格型号：96T/48T   人周期素依赖性激酶1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人周期素依赖性激酶1试剂盒、人周期素依赖性激酶1 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

HA重组甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

SDF-1/CXCL12 基质细胞衍生因子1 0.5mgSDF-1/CXCL12 基质细胞衍生因子1

CA10重组人 Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 (His 标签) Protein

AMBP Protein Human 重组人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 蛋白 (His 标签)

IL1RAPL2 Protein Human 重组人 IL-1R9 / IL1RAPL2 蛋白

A549/DDP细胞，耐DDP肺癌细胞 中国仓鼠肺细胞,CHL细胞 CM-M002小鼠肺血管平滑肌细胞SERPINA1A Others Mouse 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人细胞裂解液   U251细胞，胶质瘤细胞 鼠成纤维细胞系 猪原代膀胱上皮细胞 大鼠原代脑皮层神经元细胞

大鼠大隐静脉平滑肌原代细胞RNA结合基元蛋白20(RBM20)重组蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 20 (RBM20)

CDK16 Protein Human 重组人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 标签)

PLK1重组小鼠 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

IL12A Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 标签)

IZUMO1重组人 IZUMO1 蛋白 Protein