大鼠肠成纤维原代细胞

大鼠肠成纤维原代细胞

大鼠肠成纤维细胞分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至的消化管。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经排出体外。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内最大的微生态系统。各种哺乳动物肠的结构和功能基本相似。肠壁结构一般分4层，由外向内依次为：浆膜层(腹腔脏层)，平滑肌层，黏膜下层和黏膜层。平滑肌层的外层为纵行肌纤维，内层为环形肌纤维，两者都以螺旋式走行，它们以收缩和舒张来完成肠的机械性消化。黏膜层又分为3层：靠近黏膜下层的是一层平滑肌，称为黏膜肌层。其次为结缔组织，又称为固有层。最后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的黏膜。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

产品名称：大鼠肠成纤维细胞

组织来源：肠

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠肠成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的优良培养状态。

方法简介

实验室分离的大鼠肠成纤维采用胶原酶-联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠肠成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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IL23重组大鼠 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

CR (Calretinin 0.5mgCR (Calretinin) 钙结合蛋白(抗原)

MME重组人 CD10 / Neprilysin / MME 蛋白 Protein

IL36G Protein Human 重组人 IL36G / IL1F9 蛋白

RTN4R Protein Mouse 重组小鼠 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 蛋白 (His & Fc 标签)

615小鼠状肺腺癌瘤株;P615  非洲绿猴肾细胞系/IgR;VERO/IgR  EB病毒转化的人B淋巴细胞;HH-29  HL-60细胞，早幼粒急性白血病细胞系 人T细胞淋巴瘤,Hurt-78细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C2  人结直肠腺癌细胞 猪原代胸腺成纤维细胞 猪原代B淋巴细胞

大鼠肠成纤维原代细胞CHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7 0.5mgCHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7) 型乙酰受体α7(多肽)

IL36A Protein Human 重组人 IL1F6 / IL36A 蛋白

SPINT2重组小鼠 HAI-2 / SPINT2 蛋白 Protein

ACVR2B Protein Mouse 重组小鼠 ACVR2B 蛋白 (His & Fc 标签)

RAC2重组人 RAC2 蛋白 Protein

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。