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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介：
实验室分离的人肺微血管内皮细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的人肺微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
| 产品名称 | 人肺微血管内皮原代细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
| 英文名称 | Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells | 货号 | YS-01X6993 |
| 产品规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
人肺微血管内皮细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系(指气管、支气管等)与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形，形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。
培养信息：
包被条件PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）
培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率每2-3天换液一次
生长特性贴壁
细胞形态内皮细胞样
传代特性可传2-3代
消化液0.25%
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
| 鸡气管上皮原代细胞 | Cyto-roGFP |
| 人小气道上皮原代细胞 | DB3.1 大肠杆菌 |
| 小鼠肺大动脉平滑肌原代细胞 | Dekkera naardenensis |
| 大鼠肺大动脉平滑肌原代细胞 | DH10Bac大肠杆菌 |
| 兔肺动脉成纤维原代细胞 | DH10B大肠杆菌 |
| 鸡骨骼肌原代细胞 | DH5α（含 pEGFP-N3粒）大肠杆菌 |
| 人肺成纤维原代细胞 | DH5α（含 pTrc99a质粒）大肠杆菌 |
| 小鼠肺大动脉内皮原代细胞 | DH5α（含 pTRE3G质粒）大肠杆菌 |
| 大鼠肺大动脉内皮原代细胞 | DH5α（含 pUCGm质粒）大肠杆菌 |
| 兔肺泡巨噬原代细胞 | DH5α（含L4440载体）大肠杆菌 |
| 鸡外周血单核原代细胞 | DH5α（含pACYC177质粒）大肠杆菌 |
| 人支气管平滑肌原代细胞 | DH5α（含pACYC184质粒）大肠杆菌 |
| 小鼠肺动脉成纤维原代细胞 | DH5α（含pAN7-1质粒）大肠杆菌 |
| 大鼠肺动脉成纤维原代细胞 | DH5α（含pBARGPE1质粒）大肠杆菌 |
| 兔腹腔巨噬原代细胞 | DH5α（含pBiT1.1-N [TK-LgBiT]质粒）大肠杆菌 |
| 人小气道平滑肌原代细胞 | DH5α（含pBiT2.1-N [TK-SmBiT]]质粒）大肠杆菌 |
| 小鼠肺大静脉内皮原代细胞 | DH5α（含pBR322质粒）大肠杆菌 |
| 大鼠肺大静脉内皮原代细胞 | DH5α（含pCBASceI质粒）大肠杆菌 |
| 兔骨骼肌原代细胞 | DH5α（含pcDNA3(1087)质粒）大肠杆菌 |
| 人气管平滑肌原代细胞 | 人肺微血管内皮原代细胞DH5α（含pcDNA3（1093）质粒）大肠杆菌 |
| 兔骨内膜间充质干原代细胞 | DH5α（含pcDNA3.1(+)CircRNA Mini Vector质粒）大肠杆菌 |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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