人胃粘膜上皮细胞组织解离液

公司产品仅用于科研
产品名称：人胃粘膜上皮细胞组织解离液
规格：3×1ml
细胞冻存步骤： 
   待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤：    将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备 
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象
HDGF  肝癌衍生生长因子抗体（高迁移率族蛋白1样蛋白2抗体） 0.2ml
HOXB2  同源盒蛋白B2抗体 0.1ml
HOXB8  同源盒蛋白B8抗体 0.2ml
HSPA6  热休克蛋白70家族蛋白6抗体 0.2ml
Id1  DNA结合抑制因子1抗体 0.2ml
LAPTM4B  溶酶体蛋白跨膜β4抗体 0.2ml
LDOC1/BCUR1  癌症亮氨酸拉链下调因子1抗体 0.2ml
LOXL2  赖氨酰氧化酶相关蛋白2抗体 0.2ml
人胃粘膜上皮细胞组织解离液LRRN5  富含亮氨酸重复神经元5抗体 0.2ml
Lipophilin B  亲脂性蛋白B抗体 0.2ml
MAG1  肺癌转移相关蛋白抗体 0.2ml
MARVELD1  候选肿瘤抑制基因MARVELD1抗体 0.2ml
MOBK1B/C2orf6  2号染色体开放阅读框6抗体 0.2ml
MT1  成熟T淋巴细胞增殖蛋白1抗体 0.2ml
Mimitin  MYC诱导线粒体蛋白抗体 0.2ml
NANOGP8  干细胞转录因子NANOGP8抗体 0.2ml
NOL8  核仁蛋白8抗体 0.2ml
NUP88  核孔复合体蛋白88抗体 0.2ml
OCC1  结肠癌过度表达蛋白1抗体 0.2ml
OCIAD2  卵巢癌免疫反应抗原抗体 0.2ml
OLFM4  凋亡蛋白OLFM44抗体 0.2ml
ORAV1  口腔癌高表达的蛋白1抗体 0.2ml
ORP4/OSBP2  氧化固醇结合蛋白4抗体 0.2ml
PAGE1  前列腺相关P抗原家族成员1抗体 0.2ml
PAI1/PLANH1/Serpine 1  内皮细胞纤溶酶原激活抑制蛋白1抗体 0.2ml
NMT1  豆蔻酰基转移酶1抗体 0.2ml
GPR171/Platelet Activating Receptor H963  G蛋白偶联受体171抗体 0.2ml
POT1  端粒保护蛋白1抗体 0.2ml
PRSS3  脑胰蛋白酶3抗体 0.2ml
HDBP2/PTTG1IP  乳头瘤病毒调控因子1抗体（锌指蛋白395） 0.2ml
PCANAP2/Prostein  前列腺癌相关蛋白2抗体 0.2ml
RLBP1L1  视黄醛结合蛋白1抗体 0.2ml
RING5  环指蛋白5抗体（E3泛素蛋白连接酶RNF5） 0.2ml
RPL15  核糖体蛋白L15抗体 0.2ml
RPL19  核糖体蛋白L19抗体 0.2ml
RPL5  核糖体蛋白L5抗体 0.2ml
RRBP1  核糖体结合蛋白1抗体 0.2ml
S100A7/Psoriasin  S100钙结合蛋白A7抗体 0.2ml
RBBP6  视网膜母细胞瘤结合蛋白6抗体 0.2ml
S100PBP/S100P binding protein  S100P结合蛋白抗体 0.2ml
SAMD14  SAMD14抗体 0.2ml
CDMP1/GDF5  软骨衍生形态发生蛋白1抗体 0.2ml
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2)  磷酸化RNA聚合酶II CTD抗体 0.1ml
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S5)  磷酸化RNA聚合酶II CTD抗体 0.1ml
RNASE4/Angiogenin  血管生成素核糖核酸酶4抗体(肌性侧索硬化症蛋白) 0.1ml

操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。