人支气管平滑肌细胞组织解离液

公司产品仅用于科研
产品名称：人支气管平滑肌细胞组织解离液
规格：3×1ml
细胞冻存步骤： 
   待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤：    将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备 
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象
SRPK2  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SRPK2抗体 0.2ml
TBRG4  转化生长因子β调节蛋白4抗体 0.2ml
TLK2  丝氨酸/苏氨酸激酶TLK2抗体 0.2ml
ANKRD28  锚蛋白重复域28抗体 0.2ml
SIPA1L2  信号诱导增殖相关蛋白1样蛋白2抗体 0.2ml
DUSP7  双特异性蛋白磷酸酶7抗体 0.2ml
PPM1B  蛋白质磷酸酶1B抗体（PP2Cβ） 0.2ml
PPM1G  蛋白质磷酸酶1G抗体（PP2Cγ） 0.2ml
PPP2R1A  蛋白质磷酸酶2调节亚基1A抗体 0.2ml
PPP2R1B  蛋白质磷酸酶2调节亚基1B抗体 0.2ml
PPP2R3A  蛋白质磷酸酶2调节亚基3A抗体 0.2ml
SHOC2/Sur8  富含亮氨酸重复蛋白SHOC2抗体 0.2ml
RAMP/CDT2  维甲酸调节核基质相关蛋白 0.2ml
MTMR8  肌管素相关蛋白8抗体 0.2ml
NIFK  KI67相互作用蛋白抗体 0.2ml
phospho-NIFK/MKI67IP(Thr234)  磷酸化KI67相互作用蛋白抗体 0.1ml
TACC1  乳腺癌、胃癌抗原GA55抗体 0.2ml
人支气管平滑肌细胞组织解离液ABCF3  三磷酸腺苷结合盒转运蛋白F亚基3抗体 0.2ml
ABHD1  肺α/β水解酶蛋白1抗体 0.2ml
ABHD13  水解酶结构域蛋白13抗体 0.2ml
ABHD14B  水解酶结构域蛋白14B抗体 0.2ml
ABHD15  水解酶结构域蛋白15抗体 0.2ml
ABHD3  肺α/β水解酶蛋白3抗体 0.2ml
ABHD4  α/β水解酶4抗体 0.2ml
ACBD4  酰基辅酶A结合结构域蛋白4抗体 0.2ml
ADCK1  ADCK1蛋白抗体 0.2ml
ADCK2  ADCK2蛋白抗体 0.2ml
AKR1A1  乙醇脱氢酶1抗体 0.2ml
ALAD  δ氨基乙酰脱水酶抗体 0.2ml
TPTE  肿瘤/睾丸抗原44抗体 0.2ml
ALDH16A1  乙醛脱氢酶16家庭A1抗体 0.2ml
ALG11  天门冬酰胺连接糖基化11抗体 0.2ml
ALS2CR4  肌侧索硬化症相关蛋白4抗体 0.2ml
AMIGO3  粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体 0.2ml
AMN1  细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体 0.2ml
ANKRD11  锚蛋白重复结构域蛋白11抗体 0.2ml
ANKRD12  锚蛋白重复结构域蛋白12抗体 0.2ml

操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。