详细介绍
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
详细参考数值:
产品名称:生长抑素受体5ELISA检测试剂盒
英文名称:somatostatin receptor 5
检测范围:12.5pg/mL~400pg/mL
货号:YS-E98896
性状:盒状液体。
实验方法:竞争法、一步法、夹心法、高敏法等。
作用范围:科学研究。
样品形式:血清血浆细胞培养上清其它生物液体
保质期:6个月,本公司试剂盒系列产品均为**批次,请放心购买!
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引起ELISA测定错误结果的原因主要有:
①标本因素;
②试剂因素;
③操作因素。在实验过程中请严格按照使用说明操作,必能得出准确的实验结果,可提供免费技术咨询服务!
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
优点:
1、*抗体----高效、灵敏、特异
2、规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、良好的优化方案----重复性高,可靠性强
4、购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5、技术服务要求:专业,规范,高效
6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7、可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8、可检测指标齐全:炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9、经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,科研队伍,良好的实验设备、准确可靠的实验结果,是您可靠的合作伙伴。
ADAM17 ProteinRat重组大鼠 ADAM17 蛋白 (His 标签)
O/F培养基(HLGB)250g用于鉴别弧菌葡萄糖代谢类型(发酵型或氧化型)(SN标准)
CD302 ProteinRat重组大鼠 CD302 / CLEC13A 蛋白 (His 标签)
HA ProteinH7N7重组甲型流感 H7N7 (A/Netherlands/219/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
IL18R1 ProteinCanine重组狗 IL18R1 蛋白 (Fc 标签)
吡喹酮 英文名称:Praziquantel 规格:100mg 保存:-20℃,避光
ACP1 ProteinHuman重组人 ACP1 / LMW-PTP 蛋白 (GST 标签)
FST ProteinMouse重组小鼠 Follistatin / FST (FS288) 蛋白 (Fc 标签)
JAM2 ProteinMouse重组小鼠 JAM-2 / JAM-B 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)
芹糖甘草苷 英文名称:Liquiritin apioside 规格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
SGK3 ProteinHuman重组人 SGK3 / SGKL 蛋白 (His & GST 标签)
王不留行黄酮苷 ※ 英文名称:Semen Vaccariae Huang Tonggan * 规格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
RVS肉汤250g用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)
IL20 ProteinHuman重组人 IL20 / Interleukin-20 蛋白
生长抑素受体5ELISA检测试剂盒 Adiponectin Receptor 1脂肪组织分化相关蛋白抗体 CENP-B ELISA Kit 着丝粒蛋白B(CENP-B)ELISA试剂盒
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ADM脂联素抗体 MEC/CCL28 ELISA Kit 粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA试剂盒
Adenosine A3 Receptor肾上腺髓质素抗体 MUC3 ELISA Kit 粘蛋白3(MUC3)ELISA试剂盒
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ADRB2肾上腺素能受体β1抗体 MUC5B ELISA Kit 粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA试剂盒
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Aggrecan1晚期糖基化终末产物抗体 APRIL ELISA Kit 增殖诱导配体(APRIL)ELISA试剂盒
ALAS-E软骨蛋白聚糖抗体 EGR1 ELISA Kit 早期生长反应因子1(EGR1)ELISA试剂盒
ASPP15-氨基乙酰丙酸合酶1抗体 EPCA2 ELISA Kit 早期前列腺癌抗原2(EPCA2)ELISA试剂盒
ASPP2p53凋亡刺激蛋白1抗体 CD69 ELISA Kit 早期活化抗原CD69(CD69)ELISA试剂盒
ARIP2BP53凋亡刺激蛋白2抗体 PS-2 ELISA Kit 早老素2(PS-2)ELISA试剂盒
AIMP2素受体2B抗体 PS-1 ELISA Kit 早老素1(PS-1)ELISA试剂盒