DMEM/F12 无酚红培养基

DMEM/F12 无酚红培养基

DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。

培养基主要成份表

含有（＋）

（+）   D-葡萄糖

（+）   丙酮酸钠

不含（－）

（－）  HEPES

（－）   酚 红

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。

1）复苏DMEM/F12：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查DMEM/F12密度。

2）细胞传代：如果DMEM/F12密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗DMEM/F12 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若DMEM/F12大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待DMEM/F12生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

COLO 205人结肠癌细胞 COLO 205 human colon cancer cells 1640+10% FBS	细胞纤毛内转运同源蛋白140抗体
电子转移黄素蛋白脱氢酶抗体	VWCE抗体
NK细胞表面抑制性受体CD94抗体	乙肝病毒pre S1/S2蛋白抗体
双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（N端）	清道夫脱帽酶/热休克蛋白1抗体
类疱疹病毒8抗体/疱疹病毒8型	分子生物钟调控蛋白NOC抗体
草酰琥珀酸脱羧酶α抗体	人脐静脉内皮细胞HUVEC
COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞 人癌细胞，MCF7细胞 PT67(小鼠逆转录病毒包装细胞)	HPAEC Pellet 人肺动脉内皮细胞团块 > 1 mio.cells 心肌细胞生长添加物CMGS
9号染色体开放阅读框79抗体	NHEK.f pooled Pellet 正常人表皮角质细胞团块(少年者，混合来源) > 1 mio.cells 内皮细胞培养基ECM
钾通道四聚体结构域蛋白11抗体	Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 人细胞裂解液 (阳性对照)
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS4B	人脑瘤细胞;SF767
泌乳素受体抗体	A673(人横纹肌瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
铁螯合酶抗体	DMEM/F12 无酚红培养基Promocell C-22111 Endothelial Cell GrowthMedium 2 KIT, 内皮细胞生长培养基2型套装 500ml
大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106 肺腺癌细胞，LTEP-a-2细胞 MSCS细胞，猴的骨髓间充质干细胞	VSIG4 Others Human 人 VSIG4 人细胞裂解液 (阳性对照)
VEGFA Others Human 人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 人细胞裂解液 (阳性对照)	CL-0443SK-N-MC(人上皮瘤细胞)5×106cells/瓶×2

1.使用DMEM/F12时应注意无菌操作，避免污染。

2.本产品含有血清和双抗，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可以直接使用。

3.为保持本DMEM/F12的优良使用效果，不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。

4.所有产品请于保质期内使用，超出保质期，必须放弃使用。

5.本产品只供进一步科研使用，不可应用于临床等其他方面。

6.培养基冻融后，可能会有少量絮状物析出，不影响DMEM/F12正常使用。