详细介绍
核糖核酸酶HCAS号:9050-76-4产品概述:
核糖核酸酶H
英文名称:Ribonulease H
CAS号:9050-76-4
级别:BR
分子量:18.4kDa,单体
来源:大肠杆菌MRE-600细胞
浓度:2~5u/ul
活力定义:1个活性单位是指在37℃、20分钟内催化产生1nmol酸性可溶产物所需的酶量
酶活性分析混合物:20mM Tris-HCL(PH7.8), 40mM KC1, 8mM MgCL2, 1mM DTT, 24uM[3H]-poly(A)poly(dT), 0.03mg/ml BSA, 4%(v/v)甘油
保存缓冲液组成:25mM HEPES-KOH(PH8.0), 50mM KC1, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1mg/ml BSA, 50%(v/v)甘油
10×反应缓冲液:20mM Tris-HCL(PH7.8), 400mM KC1, 80mM MgCL2, 10mM DTT
质量控制:相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染
性状(以下信息仅供参考):重组酶,是一种核糖核酸内切酶,它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链。该酶不能消化单链或双链DNA。抑制剂有金属螯合物、SH-封闭试剂
用途:本品仅供科研,不得用于其它用途
保存:-20℃,如65℃加热10分钟会失活
公司优势:
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Western Blot操作方法:
1.培养细胞蛋白质样品的制备:
1)在合适的盐浓度下,应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。
2)选择合适的表面活性剂和还原剂,破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键,使其形成一个各自多肽的溶液。
3)尽量去除核酸,多糖,脂类等干扰分子。
4)防止蛋白质在样品处理过程中的人为的修饰,制备过程应在低温下进行,以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰(建议加入合适的蛋白酶抑制剂)
5)样品建议分装成合适的量,然后冷冻干燥或直接以液体状态置-80℃中保存,但要注意不要反复冻融。
2.组织样品的制备:
手术切除的组织块迅速置于预冷的0.95生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切成几个较小的组织块放入机戒组织匀浆器中,按组织净重,裂解液=1:10的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆,离心收集上清(如有粘稠物可超声处理,具体方法见细胞培养的样品制备,也可以冷冻干燥降解核酸后,将冻干的蛋白质样品溶解在适当的上样 buffer中,混匀后静置3小时使样品中的蛋白质充分的溶解,有5分钟即可,4度离心收集。)加入Laemmli样品缓冲液(视蛋白样品浓度,以1:1或1:2的比例混合)强力混匀,样品置100度的水浴箱水浴加热3-5分钟,10000g离心10分钟,取上清液,将其转入另一洁净的试管中,至此,电泳样品已准备就绪(样品即可立即使用也可也可以分装冻存,-20℃存放的样品可稳定保持数月。)
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