详细介绍
中性蛋白酶CAS号:9068-59-1产品概述:
中性蛋白酶
英文名称:Neutral protease;Dispase
其他名称:分散酶
CAS号:9068-59-1
级别:BR
活力:≥50units/mg
活力定义:1g固体酶粉,在30 oC,PH7.5条件下,1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸为1个酶活力单位,以u/g表示
稳定pH:5.5~8.5
最适PH:6.8~7.0
最适温度:45~50℃
性状(以下信息仅供参考):黄褐色粉末,是枯草杆菌经深层发酵培养后产生的代谢物,经盐析、干燥、磨细成粉制成,易溶于水。用微生物的中性蛋白酶,大多数是金属酶,一分子蛋白酶中含一原子锌,分子量35000~40000,等电点8~9,是微生物蛋白酶中最不稳定的酶,易自溶,会造成分子量的明显减少
用途:本品仅供科研,不得用于其它用途,提取多糖和水解各类植物蛋白。中性条件下,催化分解蛋白质或高分子肽键,其产物为小分子的蛋白胨、小肽以及个别的氨基酸
保存:RT
公司优势:
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Western Blot操作方法:
1.培养细胞蛋白质样品的制备:
1)在合适的盐浓度下,应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。
2)选择合适的表面活性剂和还原剂,破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键,使其形成一个各自多肽的溶液。
3)尽量去除核酸,多糖,脂类等干扰分子。
4)防止蛋白质在样品处理过程中的人为的修饰,制备过程应在低温下进行,以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰(建议加入合适的蛋白酶抑制剂)
5)样品建议分装成合适的量,然后冷冻干燥或直接以液体状态置-80℃中保存,但要注意不要反复冻融。
2.组织样品的制备:
手术切除的组织块迅速置于预冷的0.95生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切成几个较小的组织块放入机戒组织匀浆器中,按组织净重,裂解液=1:10的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆,离心收集上清(如有粘稠物可超声处理,具体方法见细胞培养的样品制备,也可以冷冻干燥降解核酸后,将冻干的蛋白质样品溶解在适当的上样 buffer中,混匀后静置3小时使样品中的蛋白质充分的溶解,有5分钟即可,4度离心收集。)加入Laemmli样品缓冲液(视蛋白样品浓度,以1:1或1:2的比例混合)强力混匀,样品置100度的水浴箱水浴加热3-5分钟,10000g离心10分钟,取上清液,将其转入另一洁净的试管中,至此,电泳样品已准备就绪(样品即可立即使用也可也可以分装冻存,-20℃存放的样品可稳定保持数月。)
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