详细介绍
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
详细参考数值:
产品名称:基质裂解蛋白;基质溶素ELISA检测试剂盒
英文名称:matrilysin
检测范围:0.25ng/mL~8ng/mL
货号:YS-E96912
性状:盒状液体。
实验方法:竞争法、一步法、夹心法、高敏法等。
作用范围:科学研究。
样品形式:血清血浆细胞培养上清其它生物液体
保质期:6个月,本公司试剂盒系列产品均为**批次,请放心购买!
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引起ELISA测定错误结果的原因主要有:
①标本因素;
②试剂因素;
③操作因素。在实验过程中请严格按照使用说明操作,必能得出准确的实验结果,可提供免费技术咨询服务!
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
优点:
1、*抗体----高效、灵敏、特异
2、规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、良好的优化方案----重复性高,可靠性强
4、购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5、技术服务要求:专业,规范,高效
6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7、可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8、可检测指标齐全:炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9、经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,科研队伍,良好的实验设备、准确可靠的实验结果,是您可靠的合作伙伴。
VEGFR1 / FLT-1 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µL
VEGFR1 / FLT-1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µL
VEGFR1 / FLT-1 抗體 (PE), 兔單抗 FCM 25 Test
VEGFR1 / FLT-1 抗體 (FITC), 兔單抗 FCM 25 Test
BVES / POPDC1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IHC-P 50 µg
Fas Ligand / FASLG / CD95L 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IP 50 µg
GMFB 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IF ICC/IF 50 µg
CRTAC1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P 50 µg
HK1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IF IP ICC/IF 50 µg
MCP-1 / CCL2 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µL
MCP-1 / CCL2 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µL
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CCL2 / MCP-1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µL
基质裂解蛋白;基质溶素ELISA检测试剂盒50次 DNA电泳分子量标准(λDNA/BstE II) DNAMETER(3) 4℃保存
15次 植物线粒体纯化试剂盒 Plant Mitochondria Purification Kit 常温保存
2 ug ptdTomato-N1 ptdTomato-N1 低温运输,-20℃保存
50mL Zinc Sulfate Solution(硫酸锌溶液),100mM Zinc Sulfate Solution,100mM 常温保存
50mL Potassium Chloride Solution(溶液),5M Potassium Chloride Solution,5M 常温保存
2 ug pJG45 pJG45 低温运输,-20℃保存
30次 超快非醇核酸沉淀剂 Magic Solution DNABACK 4℃保存
1瓶 NIH 3T3细胞株 NIH 3T3 低温运输和保存
10g 卵清蛋白 Albumin From Chicken Egg White,Grade II 4℃保存
10块 LB平板培养基(无抗生素) LB Petri Dish 低温
125mL PIPES Lysis Buffer with Triton,2X PIPES Lysis Buffer with Triton,2X 常温保存
2 ug pRL-null pRL-null 低温运输,-20℃保存
1瓶 B22细胞株 B22 低温运输和保存